DNA-三苯甲烷類染料體系的RLS的研究與應(yīng)用

【摘要】：本論文在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)條件，選擇熒光共振光散射光譜法研究脫氧核糖核酸(DNA)與堿性三苯甲烷類有機(jī)染料之間的相互作用前后的熒光共振光散射光譜(RLS)特征，根據(jù)RLS信號的改變值與DNA的濃度呈正比的特點(diǎn)，建立了四種測定納克級DNA的新方法。這些方法具有快速、靈敏等特點(diǎn)，應(yīng)用于魚精DNA(fsDNA)和小牛胸腺DNA(ctDNA)的定量分析，結(jié)果令人滿意。 本論文共分為四章。 第一章 研究了堿性三苯甲烷類有機(jī)染料燦爛綠(BG)與DNA在弱酸性條件下的RLS特征，考察了影響因素和最佳反應(yīng)條件，研究表明，燦爛綠在三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖溶液中，均只有較弱的共振光散射信號。在pH=6.35的Tris-HCl緩沖溶液中，加入DNA以后，在332nm處的共振光散射信號明顯增強(qiáng)，且共振光散射強(qiáng)度增加值與加入的DNA的濃度呈良好的線性關(guān)系。據(jù)此建立了一種測定DNA的新方法，線性范圍為0.13～3.50mg／L，相關(guān)系數(shù)為0.9918，最低檢出限為30.0μg／L，用于fsDNA的測定結(jié)果令人滿意。 第二章 研究了堿性三苯甲烷類有機(jī)染料維多利亞藍(lán)B(VB-B)與DNA在弱堿性條件下的RLS特征，考察了體系的影響因素和最佳反應(yīng)條件，建立了一種測定DNA的新方法。研究表明，在pH=9.81的Tris-HCl緩沖溶液中，維多利亞藍(lán)B與DNA相互作用使熒光共振光散射信號在355nm處增強(qiáng)，其信號增強(qiáng)值與加入的DNA的濃度呈良好的線性關(guān)系，線性范圍為0.11～3.00mg／L，相關(guān)系數(shù)為0.9978，檢出限為21.5μg／L，用于fsDNA的測定結(jié)果令人滿意。 第三章 研究了利用堿性三苯甲烷類有機(jī)染料甲基紫6B(MV-6B)測定DNA的最佳條件，探索了體系在pH=2.36的Tris-HCl緩沖溶液中的共振光散射特征，并考察了影響因素，建立了一種測定fsDNA和ctDNA的新方法。方法的線性范圍分別為0～1.00mg／L、0-1.50mg／L，相關(guān)系數(shù)分別為0.9993、0.9997，檢出限分別為15.3μg·L~(-1)，12.2μg·L~(-1)，用于fsDNA、ctDNA的合成樣品 的測定結(jié)果令人滿意。 第四章研究了利用堿性三苯甲烷類有機(jī)染料新品紅(NM)定 量分析DNA的最佳條件，探索了體系在pH為0.85的Tris一Hcl緩 沖溶液中，新品紅與DNA分子作用后共振光散射在314nln處增強(qiáng)， 其強(qiáng)度增加值與DNA的濃度呈線性關(guān)系，據(jù)此，建立了一種測定 DNA的共振光散射法。該方法線性范圍分別為0.12一6.00 mg/L， 0一7.oomg/L，相關(guān)系數(shù)分別為0.9984，0.9987，檢出限分別為18.3 林gL一’、21.8林gL’’，用于DNA合成樣品的測定獲得了滿意的結(jié)果。 同時，對該反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了探討，并用紫外一可見光譜求出了其形 成常數(shù)。 【關(guān)鍵詞】：脫氧核糖核酸 共振光散射光譜 燦爛綠 維多利亞藍(lán)B 甲基紫6B 新品紅 三苯甲烷類染料
【學(xué)位授予單位】：湘潭大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 引言23-34
• 第一章 燦爛綠共振光散射法測定DNA34-42
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分35
• 第二節(jié) 結(jié)果與討論35-40
• 第三節(jié) 樣品分析40-41
• 第四節(jié) 機(jī)理探討41-42
• 第二章 維多利亞藍(lán)B共振光散射法測定DNA42-49
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分42-43
• 第二節(jié) 結(jié)果與討論43-47
• 第三節(jié) 樣品分析47-48
• 第四節(jié) 機(jī)理探討48-49
• 第三章 甲基紫6B共振光散射法測定DNA49-58
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分49-50
• 第二節(jié) 結(jié)果與討論50-55
• 第三節(jié) 樣品分析55-56
• 第四節(jié) 機(jī)理探討56-58
• 第四章 新品紅共振光散射法測定DNA58-66
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分58-59
• 第二節(jié) 結(jié)果與討論59-63
• 第三節(jié) 樣品分析63-64
• 第四節(jié) 機(jī)理探討64-66
• 參考文獻(xiàn)66-75
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文75-76
• 致謝76

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