7-二氟亞甲基-5，4’-二甲烷氧基異黃酮對過氧化氫誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷的保護作用研究

【摘要】： 目的：以金雀異黃素為先導(dǎo)化合物，通過定向化學(xué)結(jié)構(gòu)改造，獲得一系列金雀異黃素的衍生物，通過建立血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷模型，從中篩選出一種較先導(dǎo)化合物更有效的對血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷具有保護作用的活性新化學(xué)實體，即7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮。研究該活性新化學(xué)實體對體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用以及抗氧化、抗粘附、抗炎癥作用，并初步探討其作用機制，為尋找具有開發(fā)前景的心血管疾病防治新型候選藥物提供實驗依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，用H_2O_2孵育細胞24小時，通過檢測培養(yǎng)液上清中乳酸脫氫酶(LDH)活性和細胞凋亡率，建立氧化誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷和凋亡模型。用氧化誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷和凋亡模型，篩選出一種活性新化學(xué)實體進行進一步實驗研究。實驗分組如下(1)空白對照組(2)H_2O_2損傷組(3)溶媒對照組(4)先導(dǎo)化合物組(5)7—二氟亞甲基—5，4’-二甲烷氧基異黃酮組(6)陽性藥物對照組。應(yīng)用MTT比色法和臺盼藍染色細胞計數(shù)法檢測內(nèi)皮細胞生長和增殖活性；吖啶橙染色熒光顯微鏡觀察和PI染色FCM分析內(nèi)皮細胞凋亡程度；DCFH-DA激活熒光FCM測定內(nèi)皮細胞活性氧含量；熒光分光光度計檢測內(nèi)皮細胞和單核細胞粘附率；ELISA法測定內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液上清中E-Selectin和ICAM-1的濃度；ELISA法測定內(nèi)皮細胞和單核細胞培養(yǎng)液上清中IL-6和TNF-α的濃度；Western Blot檢測內(nèi)皮細胞磷酸化ERK1／2、NF-κB、Caspase-3的表達。 結(jié)果：H_2O_2(1.0mmol／L)孵育內(nèi)皮細胞24h，LDH釋放增多，細胞凋亡率升高。不同濃度的金雀異黃素衍生物預(yù)處理細胞后發(fā)現(xiàn)：(1)在先導(dǎo)化合物(5，7，4’—三羥基黃酮)基本結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，C-7位引入二氟亞甲基獲得的7—二氟亞甲基—5，4’—二羥基異黃酮較金雀異黃素抗血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷活性有一定程度提高。(2)全部供試品中，7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮抗血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷活性最高。 H_2O_2(1.0mmol／L)孵育內(nèi)皮細胞24h，LDH活性增高；內(nèi)皮細胞生長和增殖受到明顯抑制；細胞凋亡增多；內(nèi)皮細胞活性氧顯著升高；內(nèi)皮細胞和單核細胞的粘附增多，內(nèi)皮細胞粘附分子E-SelecEin和ICAM-1的釋放增加；炎癥因子IL-6和TNF-α釋放亦增加；內(nèi)皮細胞NF-κB、磷酸化ERK1／2和Caspase-3的表達上調(diào)。用7—二氟亞甲基—5，4’-二甲烷氧基異黃酮預(yù)先保護后可見：(1)細胞生長和增殖活性呈濃度依賴性升高，LDH釋放減少；細胞凋亡率呈濃度依賴性降低；活性氧升高明顯受抑。(2)血管內(nèi)皮細胞和單核細胞的粘附率呈濃度依賴性降低，內(nèi)皮細胞E-Selectin和ICAM-1的釋放減少。(3)內(nèi)皮細胞和單核細胞炎癥因子IL-6和TNF-α的釋放減少。(4)內(nèi)皮細胞磷酸化ERK1／2、NF-κB和Caspase-3的表達下調(diào)。 結(jié)論： 1、7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮對血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷具有保護作用。 2、7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮具有顯著抗氧化作用。 3、7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮通過抑制E-Selectin、ICAM-1的釋放發(fā)揮拮抗氧化應(yīng)激損傷血管內(nèi)皮細胞與單核細胞粘附的作用。 4、7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮通過抑制氧化應(yīng)激損傷血管內(nèi)皮細胞炎癥因子IL-6、TNF-α的釋放，從而抑制氧化應(yīng)激損傷血管內(nèi)皮介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。 5、7—二氟亞甲基—5，4’—二甲烷氧基異黃酮的血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷保護作用與下調(diào)磷酸化ERK1／2的表達，抑制NF-κB、Caspase-3的活性有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】：金雀異黃素 7-二氟亞甲基-5 4’-二甲烷氧基異黃酮 內(nèi)皮細胞 氧化應(yīng)激 保護作用
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R96
【目錄】：

• 一、中文摘要4-6
• 二、英文摘要6-9
• 三、論文正文9-51
• (一) 前言9-12
• (二) 實驗材料12-17
• (三) 實驗方法17-24
• (四) 實驗結(jié)果24-41
• (五) 討論41-46
• (六) 結(jié)論46-47
• (七) 參考文獻47-51
• 四、綜述51-68
• 五、附錄68-71
• 六、致謝71

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