自行設(shè)計(jì)大黃藥材成分的提取，分離，鑒定試驗(yàn)

【專家解說(shuō)】：大黃可減輕內(nèi)毒素性低血壓，消除氧自由基，降低再灌注期血漿、肺、小腸等內(nèi)源性一氧化氮的水平，降低腸、肝、肺毛細(xì)血管通透性，減輕內(nèi)毒素引起的腸壁血管通透性增加，防止腸道細(xì)菌移位及內(nèi)毒素進(jìn)入血循環(huán)等等。臨床可用于嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染性休克、MODS等危重病預(yù)防及治療胃腸功能衰竭。我們的經(jīng)驗(yàn)：生大黃30克煎成100ml，灌腸或口服，100ml,1-3次/日，亦可灌腸和口服并用。直到腸鳴音恢復(fù)開始減量　大黃含有蒽類衍生物、苷類化合物、鞣質(zhì)類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油類等。 　　1. 蒽類衍生物分為：⑴ 游離蒽醌衍生物，如蘆薈大黃素（aloe emodin）、土大黃素（chrysaron）、大黃酚（chrysophanol）、大黃素（emodin）、異大黃素（isoernodin）、蟲漆酸D（laccaic acid D）、大黃素甲醚（physcion）、大黃酸（rhein）；⑵ 結(jié)合蒽醌化合物，有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚的單和雙葡萄糖甙；大黃素、大黃素甲醚的單糖甙；蒽酚和蒽酮化合物：大黃二蒽酮（rheidin）、掌葉二蒽酮（palmidin）以及與糖結(jié)合的甙如番瀉甙（sennoside）A、B、C、D、E、F等。 　　2. 苷類化合物：土大黃甙（rhaponticin）、3，5，4’-三羥基芪烯一4’-O-β-D-（6’-O-沒食子酰）葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy-stilbene－4’-O-β-D-（6’-O-gallayl）-glucoside）、3，5，4’-三羥基茋烯-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy stilbene-4’-O-β-D-glucopyranoside）。 　　3. 萘衍生物：torachrysone-8-O-β-D-glucopy ranoside，torachrysone-8-（6′-oxaly）-glucoside及決明松（torachryson）。 　　4. 鞣質(zhì)類：沒食子酰葡萄糖、d-兒茶素、沒食子酸、大黃四聚素（tetrann）等。大黃四聚苯經(jīng)水解，得沒食子酸、肉桂酸及大黃明（rheosmin）。此外合有樹脂。 　　尚含有有機(jī)酸：蘋果酸、琥珀酸、草酸、乳酸、桂皮酸、異丁烯二酸、檸檬酸、延胡紊酸等。 　　大黃中還含有揮發(fā)油、脂肪酸及植物甾醇等。本品橫切面：根木栓層及皮層大多已除去。韌皮部明顯；薄壁組織發(fā)達(dá)。形成層成環(huán)。木質(zhì)部射線較密，寬2～4列細(xì)胞，內(nèi)含棕色物；導(dǎo)管非木化，常1至數(shù)個(gè)相聚，稀疏排列。薄壁細(xì)胞含草酸鈣簇晶，并含多數(shù)淀粉粒。根莖髓部寬廣，其中常見黏液腔，內(nèi)有紅棕色物；異型維管束散在，形成層成環(huán)，木質(zhì)部位于形成層外方，韌皮部位于形成層內(nèi)方，射線呈星狀射出。粉末黃棕色。草酸鈣簇晶直徑20～160μm，有的至190μm。具緣紋孔、網(wǎng)紋、螺紋及環(huán)紋導(dǎo)管非木化。淀粉粒甚多，單粒類球形或多角形，直徑3～45μm，臍點(diǎn)星狀；復(fù)粒由2～8分粒組成。 　　取本品粉末少量，進(jìn)行微量升華，可見菱狀針晶或羽狀結(jié)晶。 　　取本品粉末0.1g，加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml,蒸干加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml,置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠Ｈ薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸(155:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。 　　【檢查】 　　土大黃苷 取本品粉末0.2g，加甲醇2ml,溫浸10分鐘，放冷，取上清液10μl,點(diǎn)于濾紙上，以45％乙醇展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。 　　干燥失重 取本品，在 105℃干燥6小時(shí)，減失重量不得過(guò)15.0％（附錄Ⅸ G）。 　　總灰分 不得過(guò)10.0％（附錄Ⅸ K）。 　　酸不溶性灰分 不得過(guò)0.8％（附錄Ⅸ K）。 　　【含量測(cè)定】 　　照高效液相色譜法(附錄Ⅵ D)測(cè)定。 　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。 　　對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，分別置50ml量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取大黃素溶液1ml、大黃酚溶液2ml，分別置25m l量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(大黃素每1ml中含4μg、大黃酚每1ml中含8μg)。 　　供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約0.1g[同時(shí)另取本品粉末測(cè)定水分(附錄ⅨH 第二法)]，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾5ml，置50ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超聲處理5分鐘，再加氯仿10ml，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗中，分取氯仿層，酸液用氯仿提取2次，每次約8ml，合并氯仿液，以無(wú)水硫酸鈉脫水，氯仿液移至100ml錐形瓶中，揮去氯仿，殘?jiān)芗蛹状?0ml，稱定重量，置水浴中微熱溶解殘?jiān)?，放冷后，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。 　　測(cè)定法 分別精密吸取上述兩種對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 　　本品按干燥品計(jì)算，含大黃素(C15H10O5)和大黃酚(C15H10O4)的總量不得少于0.05％。