如何制作微生物種子

【專家解說(shuō)】：1 、非切片法 即不用切片機(jī)，不經(jīng)切片手續(xù)而制成切片的方法，根據(jù)材料性質(zhì)的不同，有不同的處理方法，該類方法操作簡(jiǎn)單快捷，其中鋪片法、封藏法可使原有組織結(jié)構(gòu)不被破壞，涂片法、壓片法彌補(bǔ)了用包埋、切片法所不可能觀察清楚的不足，因此是顯微標(biāo)本制作的中常用的手段。 1.1 涂片法 主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能切片成薄片的液態(tài)顆粒性材料，可在載玻片上涂成單層細(xì)胞，再經(jīng)固定，脫水，染色等手段制成永久標(biāo)本。 1.2 鋪片法 主要用于動(dòng)、植物組織的表皮層觀察，可活體取待觀察動(dòng)、植物組織，用尖鑷子撕去一層表皮，迅速平鋪在載玻片上。 如洋蔥表皮細(xì)胞的鋪片制備。 1.3 壓片法 一些較幼嫩，柔軟的材料可將其置載玻片上，用小解剖刀將其分散，加染料一滴，再蓋上蓋玻片，用拇指垂直用力擠壓，使組織散成一薄片，再進(jìn)行觀察，如植物根尖觀察染色體，花粉粒觀察發(fā)育階段等。 1.4 離析法 該方法是利用化學(xué)試劑使組織的細(xì)胞間質(zhì)溶解，使細(xì)胞能分散成單個(gè)個(gè)體。經(jīng)染色、脫水、透明即可觀察其個(gè)體形態(tài)，適用于肌肉、葉片、莖等部位。 1.5 磨片 用于很堅(jiān)硬的組織，如骨和牙。 2 、切片法 切片法是必須依靠手或切片機(jī)將組織切成薄片來(lái)進(jìn)行觀察的方法。為了能清晰地觀察到動(dòng)、植物的組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)，必須先經(jīng)過(guò)一系列步驟將組織內(nèi)滲入某些支持物質(zhì)，使組織變硬以利于切成薄片，根據(jù)所用支持劑的種類不同，可分為徒手切片法、石蠟切片法、火棉膠切法、冰凍切片法等類型，切成薄片后還需要去蠟，染色、脫水、透明等步驟，將其制成永久標(biāo)本。 下邊以石蠟切片為例，介紹顯微標(biāo)本制作方法。 2.1 取材 根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模x擇相應(yīng)的材料，材料要求新鮮、準(zhǔn)確、完整，材料要避免擠壓、挫傷、干枯。所采集材料應(yīng)立即放入固定劑，并編號(hào)，注明采集時(shí)間、地點(diǎn)、名稱、組織部位，所取組織塊要大小適當(dāng)，即要能說(shuō)明問(wèn)題，又要考慮固定劑的穿透能力。一般組織學(xué)取材稍大，細(xì)胞學(xué)取材稍小，植物組織取材稍小，動(dòng)物組織取材要稍大。 動(dòng)、植物的任何組織部位，要制成切片，首先用化學(xué)試劑將其固定，固定的作用在于通過(guò)固定劑，在盡量短的時(shí)間內(nèi)使原生質(zhì)體停止生命活動(dòng)，并如同生前一樣精細(xì)的保存其細(xì)胞結(jié)構(gòu)，同時(shí)易于后步驟的染色所以良好的固定劑應(yīng)該具備以下條件:迅速滲入組織殺死原生質(zhì)體，在短時(shí)間內(nèi)，組織內(nèi)外完全固定;盡可能避免使組織膨脹或收縮，并且軟硬合適于切片;增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度，易于鑒別，同時(shí)增加媒染作用和染色能力。固定液同時(shí)是防腐液，使材料不致變質(zhì)。 2.3 脫水 脫水是用一種即能與水又能與透明液混合的液體來(lái)逐漸置換樣品中游離的水?，F(xiàn)采用的脫水劑一般是丙酮或乙醇來(lái)進(jìn)行梯度脫水，脫水的時(shí)間，可根據(jù)組織的類型，大小而定。 脫水的過(guò)程: 一般是30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%→90%→100% →100% 脫水應(yīng)逐步而不應(yīng)跨越太大的進(jìn)行，否則將引起組織強(qiáng)烈的收縮或變形，在經(jīng)無(wú)水乙醇處理時(shí)，應(yīng)保證試劑的純度。 2.4 透明 透明是用一種即能與酒精又能與包埋介質(zhì)混合的液體來(lái)置換樣品中的酒精，從而為最終的包埋創(chuàng)造一個(gè)有利的條件。 現(xiàn)采用的透明劑一般是二甲苯、甲苯、氯仿等。 其過(guò)程為:1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3乙醇混合液→二甲苯→二甲苯 二甲苯是使用最廣泛的一種透明劑，它具有滲透力強(qiáng)，溶解石蠟量大，又易揮發(fā)的優(yōu)點(diǎn)，其缺點(diǎn)是易使組織收縮，變硬，變脆，因此透明時(shí)間應(yīng)根據(jù)組織塊大小及質(zhì)地酌情而定。 2.5 滲蠟 將完成透明步驟的組織塊浸入透明劑與石蠟混合液中，不斷提高石蠟的比例，直至用石蠟完全置換了組織塊中的透明劑，便于今后的包理與切片。 石蠟有液態(tài)與固態(tài)二種，滲蠟要在恒定溫箱(60°c)中進(jìn)行，以保證石蠟處于液態(tài)中。 2.6 包理 組織塊經(jīng)石蠟滲透后，其內(nèi)部間隙已完全被石蠟占據(jù)，此時(shí)還需要用同種硬度的石蠟包理成蠟塊以利于后邊的切片，包理可用相同的器具，也可折疊一牛皮紙盒。 將液態(tài)石蠟緩緩倒入紙盒中，再用鑷子輕輕將浸好蠟的組織塊夾入紙盒，淺埋在石蠟內(nèi)，待石蠟冷卻成固態(tài)即包埋完畢。 至此，一塊組織已完成前處理過(guò)程，可以切片，前邊的步驟表明看來(lái)既無(wú)高深的理論，又無(wú)復(fù)雜的技術(shù)，一切看似簡(jiǎn)單，但一步做不到都會(huì)造成整個(gè)制片的前功盡棄。 2.7 切片 修塊:切片前需修整蠟塊，即將包埋好的一大塊蠟塊切開，使每一小塊都含有一塊組織，并將這組織周圍的石蠟切除，將組織修成一小塊蠟塊并粘在大小適宜的硬木塊上，以便于固定在切片機(jī)上。 貼片:一手持毛筆，一手轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)，切片的蠟片連成一長(zhǎng)條蠟帶 切下的蠟帶放在一干凈黑紙上，用小刀根據(jù)需要切成數(shù)段，分別貼在干凈載玻片上。在恒溫展片臺(tái)上展平、烘干。 2.8 染色 切片可用不同方法，使其干燥，然后進(jìn)行染色。因?yàn)槊恳粡堓d片上粘貼的是蠟帶，因此必須先用二甲苯去除石蠟再用酒精去除二甲苯，再進(jìn)入水中，才能染色，染色的方法很多，要根據(jù)每張標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的染劑，最常用的是蘇木精，伊紅染色蘇木精使細(xì)胞核是深紫色，伊紅使細(xì)胞質(zhì)顯粉紅色，以此顯示清晰的細(xì)胞形態(tài)和核的大小，位置，染色后再根據(jù)制片的基本原理，使帶水的載片經(jīng)歷脫水→透明步驟最后喲感樹膠封片 基本步驟如下:二甲苯×2(脫蠟)→酒精+二甲苯(1:1)→100%酒精×2→90% 酒精→80%→70%→50%→30%→水→蘇木精染色(鏡檢)→水→50%→70%→90%→0.5%伊紅(95%酒精配制)→95%→100%×2→二甲苯:酒精(1:1)→二甲苯×2→樹膠封片 簡(jiǎn)便方法: 先將各種材料切成片，要薄，不要用力的用鑷子夾，放在載玻片上，在載玻片上滴一滴水，將薄片放入，如顏色十分淡，加碘酒染色，蓋上蓋玻片，用紙巾將水吸干，即可。