掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的方法

【專(zhuān)家解說(shuō)】：驗(yàn)一 生物組織中還原糖,脂肪,蛋白質(zhì)的鑒定 一,實(shí)驗(yàn)原理 (1)鑒定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的理念: 某些化學(xué)試劑 + 生物組織中有關(guān)有機(jī)化合物 產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng). (2)具體原理: ①可溶性還原糖+ 斐林試劑→磚紅色沉淀. ②脂肪小顆粒 + 蘇丹Ⅲ染液→橘黃色小顆粒. ③蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑→紫色反應(yīng). 二,目標(biāo)要求 初步掌握鑒定生物組織中可溶性還原糖,脂肪,蛋白質(zhì)的基本方法. 三,重點(diǎn),難點(diǎn) 1.重點(diǎn) ①初步掌握鑒定生物組織中可溶性還原糖,脂肪,蛋白質(zhì)的基本方法. ②通過(guò)實(shí)驗(yàn)的操作和設(shè)計(jì)培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力,掌握探索實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)技巧,從而培養(yǎng)創(chuàng)新思維能力. 2.難點(diǎn) 根據(jù)此實(shí)驗(yàn)方法,原理,設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定常見(jiàn)食物的成分. 四,實(shí)驗(yàn)材料 1.可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn):選擇含糖量較高,顏色為白色或近白色的植物組織,以蘋(píng)果,梨為最好. 2.脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn):選擇富含脂肪的種子,以花生種子為最好(實(shí)驗(yàn)前浸泡3h～4h). 3.蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn):可用浸泡1d～2d的黃豆種子(或用豆?jié){,或用雞蛋蛋白). 五,儀器,試劑 1.儀器:剪刀,解剖刀,雙面刀片,試管,試管架,試管夾,大小燒杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精燈,三腳架,石棉網(wǎng),火柴,研缽,石英砂,紗布,載玻片,蓋玻片,毛筆,吸水紙,顯微鏡. 2.試劑:①斐林試劑(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液);②蘇丹Ⅲ染液;③雙縮脲試劑;④ 體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液;⑤蒸餾水. 六,方法步驟(演示教學(xué)課件) 1.制備試劑. 2.可溶性還原糖的鑒定,方法,步驟. 3.脂肪的鑒定,方法,步驟. 4.蛋白質(zhì)的鑒定,方法,步驟. 七,教學(xué)過(guò)程 新課引入:我們?cè)诨瘜W(xué)中學(xué)習(xí)過(guò)物質(zhì)的鑒定,其原理是被鑒定的物質(zhì)與所用的化學(xué)試劑要么發(fā)生顏色反應(yīng),要么產(chǎn)生沉淀,我們生物學(xué)上也采用此原理,在生物學(xué)中物質(zhì)鑒定的理念是:某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng). 新課教學(xué):(具體原理) ①可溶性還原糖+ 斐林試劑→磚紅色沉淀.(水浴加熱) ②脂肪小顆粒 + 蘇丹Ⅲ染液→橘黃色小顆粒.(要顯微鏡觀察) ③蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑→紫色反應(yīng).(要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4 溶液) 教師提問(wèn):在我們高中生物中還學(xué)習(xí)過(guò)那些利用顏色反應(yīng)鑒定物質(zhì)的 用到了那些化學(xué)試劑 由產(chǎn)生了那些特定的顏色呢 學(xué)生回答:略.如果回答不全教師補(bǔ)充: ④染色(質(zhì))體+ 醋酸洋紅(或龍膽紫) 紅色(或紫色) ⑤淀粉+碘液 藍(lán)色 ⑥D(zhuǎn)NA+二苯胺試劑 藍(lán)色(水浴加熱) ⑦大腸桿菌+伊紅-美藍(lán) 產(chǎn)生紫色,略帶金屬光澤 今天,我們學(xué)習(xí)鑒定生物組織中還原糖,脂肪,蛋白質(zhì)的基本方法. (一),還原糖的鑒定 1,還原糖的鑒定步驟: 選材: 蘋(píng)果:洗凈,去皮,切塊,取5g放如研缽中 制備組織樣液 研磨成漿:加石英砂,加5 ml水研磨 注入組織樣液2ml 過(guò)濾:將玻璃漏斗插入試管中,漏斗上墊一層紗布 加斐林試劑:2ml(由斐林試劑甲液和乙液充分混合而成,不能分別加入) 水浴加熱:煮沸2min 觀察溶液顏色變化:淺藍(lán)色→棕色→磚紅色. 結(jié)論:還原糖與斐林試劑在加熱煮沸的過(guò)程中生成磚紅色沉淀 2,實(shí)驗(yàn)成功的要點(diǎn): ①還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn):選擇含糖量較高,顏色為白色或近白色的植物組織,以蘋(píng)果,梨為最好. ②斐林試劑要兩液混合均勻且現(xiàn)配現(xiàn)用. 斐林試劑的配制過(guò)程示意: 斐林試劑甲液( 0.1 g/ml的 NaOH 溶液) 斐林試劑乙液( 0.05 g/ml的 CuSO4 溶液) ③在鑒定尿液中是否含有葡萄糖時(shí)還能用其他那些鑒定方法 學(xué)生回答:還可以用斑氏試劑產(chǎn)生磚紅色沉淀;及糖尿試紙據(jù)糖的由少到多產(chǎn)生淺藍(lán),淺綠,棕或深棕色. (二),脂肪的鑒定 1,脂肪的鑒定步驟: 取材:花生種子(浸泡3-4h),將子葉削成薄片 取理想薄片 在薄片上滴2-3滴蘇丹Ⅲ染液 去浮色 制成臨時(shí)裝片 觀察:先在低倍鏡下,找到材料的脂肪滴,然后,轉(zhuǎn)為高倍鏡觀察. 結(jié)論:細(xì)胞中的圓形脂肪小顆粒已經(jīng)被染成橘黃色. 2,實(shí)驗(yàn)成功的要點(diǎn): ①.脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn):選擇富含脂肪的種子,以花生種子為最好(實(shí)驗(yàn)前浸泡3h～4h). ②該試驗(yàn)成功的關(guān)鍵是獲得只含有單層細(xì)胞理想薄片. ③滴蘇丹Ⅲ染液染液染色2-3min,時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),以防細(xì)胞的其他部分被染色. (三),蛋白質(zhì)的鑒定 蛋白質(zhì)的鑒定步驟: 選材:卵清稀釋液或黃豆(浸泡1-2d) 豆?jié){ 濾液 結(jié)論:蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生紫色反應(yīng). 2,實(shí)驗(yàn)成功的要點(diǎn): ①蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn):可用浸泡1d～2d的黃豆種子(或用豆?jié){,或用雞蛋蛋白稀釋液). ②雙縮脲試劑的使用,一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液),再加入雙縮脲試劑B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液). ③還可設(shè)計(jì)一只加底物的試管,不加雙縮脲試劑,進(jìn)行空白對(duì)照,說(shuō)明顏色反應(yīng)的引起是蛋白質(zhì)的存在與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng),而不是空氣的氧化引起. 教學(xué)小結(jié): 1,斐林試劑和雙縮脲試劑的比較 相同點(diǎn): ①都由NaOH溶液和CuSO4溶液構(gòu)成; ②斐林試劑甲液和雙縮脲試劑A都為0.1g/mL NaOH溶液. 不同點(diǎn): ①CuSO4溶液濃度不一樣:斐林試劑乙液為 0.05 g/mLCuSO4溶液,雙縮脲試劑 B為 0.01g/mLCuSO4溶液. ②配制比例不一樣. ③使用方法不一樣:斐林試劑是甲,乙液一起混合后再使用,雙縮脲試劑則是先向待鑒定材料加入A試劑搖勻后,再加入試劑B. ④鑒定的對(duì)象不一樣:斐林試劑鑒定的是還原糖,雙縮脲試劑鑒定的是蛋白質(zhì). ⑤反應(yīng)本質(zhì)及顏色反應(yīng)不一樣. 2,還原糖,脂肪,蛋白質(zhì)鑒定之比較 還原糖的鑒定 脂肪的鑒定 蛋白質(zhì)的鑒定 材料的選取: 富含糖,顏色為白色或近于白色 富含脂肪 富含蛋白質(zhì) 材料的處理: 去皮,研磨 浸泡 —— 試劑的使用: 甲液與乙液混合均勻后使用 染色和洗浮色不宜過(guò)長(zhǎng) 先加A液再滴加B液 反應(yīng)的本質(zhì): 新制的Cu(OH)2溶液與—CHO(還原糖的醛基)反應(yīng) —— 堿性條件下Cu2+ 與肽鍵反應(yīng) 3,蘇丹Ⅲ染液與蘇丹Ⅳ染液的比較 都是用來(lái)鑒定脂肪.蘇丹Ⅳ染液更易溶于脂肪,所以染色更深,同時(shí)要求染色時(shí)間更短