中草藥有效成分的分離與精制方法按照原理可分為哪幾大類？

【專家解說】：結(jié)晶法 需要掌握結(jié)晶溶劑選擇的一般原則及判定結(jié)晶純度的方法。 結(jié)晶溶劑選擇的一般原則：對欲分離的成分熱時溶解度大，冷時溶解度小；對雜質(zhì)冷熱都不溶或冷熱都易溶。沸點要適當(dāng)，不宜過高或過低，如乙醚就不宜用。 判定結(jié)晶純度的方法：理化性質(zhì)均一；固體化合物熔距 ≤ 2℃；TLC或PC展開呈單一斑點；HPLC或GC分析呈單峰。 沉淀法 可通過4條途徑實現(xiàn)： 1)通過改變?nèi)軇O性改變成分的溶解度。常見的有水提醇沉法(沉淀多糖、蛋白質(zhì))、醇提水沉法(沉淀樹脂、葉綠素)、醇提乙醚或丙酮沉淀法(沉淀皂苷)等。 2)通過改變?nèi)軇姸雀淖兂煞值娜芙舛取Ｊ褂幂^多的是鹽析法，即在中藥水提液中加入一定量的無機鹽，使某些水溶性成分溶解度降低而沉淀出來。 3)通過改變?nèi)軇﹑H值改變成分的存在狀態(tài)。適用于酸性、堿性或兩性親脂性成分的分離。如分離堿性成分的酸提堿沉法和分離酸性成分的堿提酸沉法。 4) 通過加入某種試劑與欲分離成分生成難溶性的復(fù)合物或化合物。如鉛鹽沉淀法(包括中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛)、雷氏鹽沉淀法(分離水溶性生物堿)、膽甾醇沉淀法(分離甾體皂苷)等。 萃取法，包括以下： 1.液-液萃取，選擇兩種相互不能任意混溶的溶劑，通常一種為水，另一種為石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇等。將待分離混合物混懸于水中，置分液漏斗中，加適當(dāng)極性的有機溶劑，振搖后放置，分取有機相或水相，即可將極性不同的成分分離。分離的難易取決于兩種物質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值，即分離因子。分離因子愈大，愈好分離。 2.紙色譜(PC)，屬于分配色譜?？捎糜谔堑臋z識、鑒定，亦可用于生物堿的色譜鑒別等。 3.分配柱色譜，可分為正相色譜與反相色譜。正相色譜固定相極性大，流動相極性小，可用于分離水溶性或極性較大的成分。反相色譜與此相反，適宜分離脂溶性化合物。 根據(jù)分子量大小和用以下方法： 1.透析法，適用于水溶性的大分子成分(如蛋白質(zhì)、多肽、多糖)與小分子成分(如氨基酸、單糖、無機鹽)的分離。 2.凝膠過濾法，又稱凝膠滲透色譜、分子篩過濾、排阻色譜。分離混合物時，各組分按分子由大到小的順序先后流出并得到分離。常用凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex G)和羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)。前者只適于在水中應(yīng)用。后者既可在水中應(yīng)用，又可在有機溶劑中應(yīng)用，分離混合物時，既有分子篩作用，又有吸附作用。如分離游離黃酮時，主要靠吸附作用；分離黃酮苷時，則分子篩的性質(zhì)起主導(dǎo)作用。 3.超濾法 4.超速離心法 還有吸附法，又包括 1)硅膠吸附色譜 硅膠為極性吸附劑，吸附力的大小取決于被分離物質(zhì)的極性(極性越大，吸附力越強)和洗脫溶劑的極性(溶劑極性越弱，硅膠對被分離物質(zhì)的吸附能力越強)。因此，用硅膠吸附色譜分離一組極性不同的混合物時，極性大的物質(zhì)因吸附力大而洗脫慢；洗脫溶劑的極性增大，洗脫能力增強，洗脫速度加快。另外硅膠有一定的酸性，在用其分離堿性成分時，需注意。 2)氧化鋁吸附色譜 氧化鋁亦為極性吸附劑，其吸附規(guī)律與硅膠相似。不同的是，氧化鋁有一定的堿性，且具有鋁離子，在用其分離一些酸性或酚性成分時，易產(chǎn)生不可逆吸附而不能被溶劑洗脫。如蒽醌類、黃酮類(葛根異黃酮除外)成分分離時一般不選擇氧化鋁。 3)活性炭吸附色譜 活性炭為非極性吸附劑，其吸附規(guī)律與硅膠、氧化鋁恰好相反。對非極性物質(zhì)具有較強的親和力，在水中對物質(zhì)表現(xiàn)出強的吸附能力。常用于水溶液的脫色素，也可用于糖、環(huán)烯醚萜苷的分離純化等。 4)聚酰胺吸附色譜 聚酰胺吸附屬于氫鍵吸附，系通過其分子中眾多的酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基，或酰胺鍵上的游離胺基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。因此，聚酰胺吸附色譜特別適合分離酚類、醌類和黃酮類化合物。聚酰胺對被分離物質(zhì)吸附力的大小取決于被分離物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中可與聚酰胺形成氫鍵締合的基團數(shù)目及氫鍵作用強度。同時，溶劑也會影響聚酰胺對被分離物質(zhì)的吸附，表現(xiàn)出各種溶劑在聚酰胺吸附色譜中洗脫能力有大有小，其由弱到強的大致順序為水、甲醇、丙酮、氫氧化鈉水溶液等。 5)大孔吸附樹脂吸附色譜 大孔吸附樹脂同時具有吸附性和分子篩性。一般非極性化合物在水中易被非極性樹脂吸附，極性物質(zhì)在水中易被極性樹脂吸附。物質(zhì)在溶劑中的溶解度大，樹脂對此物質(zhì)的吸附力就小，反之就大。對非極性大孔吸附樹脂來說，洗脫溶劑極性越小，洗脫能力越強。該法可用于皂苷類成分的純化分離。