中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉測定法》

【專家解說】：1 適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉含量的測定。 2 參考標(biāo)準(zhǔn) GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉測定法》 GB3523—83《谷類、油料作物種子水分測定法》 3 測定原理 淀粉與碘形成碘—淀粉復(fù)合物，并具有特殊的顏色反應(yīng)。支鏈淀粉與碘生成棕紅色 復(fù)合物，直鏈淀粉與碘生成深藍(lán)色復(fù)合物。在淀粉總量不變條件下，將這兩種淀粉分散 液按不同比例混合，在一定的波長和酸度條件下與碘作用，生成由紫紅到深藍(lán)一系列顏 色，代表其不同直鏈淀粉與支鏈淀粉含量比例，根據(jù)吸光度與直鏈淀粉濃度呈線性關(guān) 系，可用分光光度計(jì)測定。 4 儀器、設(shè)備 4.1 粉碎機(jī)（實(shí)驗(yàn)室用旋風(fēng)磨）。 4.2 分光光度計(jì)：721型或具有相同性能的其他型號。 4.3 分析天平：感量 0.0001g。 4.4 玻璃儀器：50ml具塞刻度試管，100ml容量瓶。 5 試劑配制 除注明者外均為分析純，水為蒸餾水。 5.1 氫氧化鈉（GB629—81），lmol.L-1、0.09mol，L-1水溶液，準(zhǔn)確標(biāo)定。 5.2 冰乙酸（GB676—78），1mol L-1水溶液，準(zhǔn)確標(biāo)定。 5.3 碘貯備溶液及碘試劑：稱 2g碘和 20g碘化鉀（GB1272—77）用蒸餾水溶解并稀釋 至 100ml，即為碘貯備液。取 10ml碘貯備液稀釋至 100ml，即為碘試劑。 5.4 馬鈴薯直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液：1mg/ml，取烘干（55-56℃ 真空干燥）的馬鈴薯直鏈 淀粉純品，稱取重量相當(dāng)于含 0.1000g淀粉，放入 100ml容量瓶中，加入 1ml無水乙醇 濕潤樣品，再加 9mlmol·L-1氫氧化鈉溶液，于沸水浴分散 10min，迅速冷卻后，用水定 容。 5.5 支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液：1mg/ml，選擇與待測谷物樣品相應(yīng)的蠟質(zhì)谷物標(biāo)準(zhǔn)品，稱取 重量相當(dāng)于含 0.1000g粗淀粉，放入 100ml容量瓶中，加 1ml無水乙醇，再加 9ml1mol· L-1氫氧化鈉溶液，于沸水浴加熱 10min，迅速冷卻后，用水定容。 5.6 石油醚（HG3—1003—76），沸程 60-90 。 6 樣品的選取和制備 6.1 將樣品挑選干凈（谷子脫殼、稻谷制成精米），按四分法取樣 20g。 6.2 用粉碎機(jī)將樣品粉碎，全部通過 0 177mm孔徑篩（80號），混勻裝入磨口瓶備用。 7 測定步驟 7.1 混合校準(zhǔn)曲線繪制 取 6個 100ml容量瓶，分別加入 1mg/ml馬鈴薯直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、0.25、0.50、 1.00、1.50、2.00ml，再依次加入1mg/ml支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液 5、4.75、4.50、4.00、 3.50、3.00ml，總量為 5ml。另取 1個 100ml容量瓶，加入 0.09mo1.L-1氫氧化鈉溶液 5ml作空白。然后于各瓶中依次加入約 50ml水、1ml1mol·L-1乙酸及 1ml碘試劑。用水 定容后顯色 10min，在 620nm處讀取吸光度。 以直鏈淀粉毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線或建立回歸方程。 7.2 樣品測定 7.2.1 按 GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉測定法》和 GB3523—83《谷類、油料作物種 子水分測定法》測定樣品的粗淀粉含量和水分。 7.2.2 樣品分散：稱取相當(dāng)于 0.1000g粗淀粉的樣品（如按樣品干重計(jì)算直鏈淀粉百分 含量時(shí)，稱取樣品 100mg）于 100ml容量瓶中，加 1ml無水乙醇，充分濕潤樣品，再加 入 9ml1mol.L-1氫氧化鈉溶液，于沸水浴中分散 10min，迅速冷卻，用水定容。 7.2.3 脫脂：取 20ml分散液于 50ml具塞刻度試管中，加入 7-10ml石油醚，間歇搖動 10min，靜止 15min，分層后用連接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石油醚層。重復(fù)以上 操作 2-5次（精米脫脂二次，玉米、谷子須脫脂三次）。 7.2.4 測定：吸取脫脂后的堿分散液 5.00ml于 100ml容量瓶中，加水 50ml，再加入 lmol L-1乙酸溶液 1ml及碘試劑 1ml，用水定容。顯色 10min后，在 620nm處讀取吸光 度。 注：測定樣品與繪制校準(zhǔn)曲線時(shí)的溫度相差不能超過 1 。 8 結(jié)果計(jì)算 8.1 計(jì)算公式 a.直鏈淀粉（%，占淀粉總量）按式（1）計(jì)算： G×100 直鏈淀粉（%，占淀粉總量） =-------×100…………………………………（1） m1×5 b.直鏈淀粉（%，占樣品干重）按式（2）計(jì)算： G×100 直鏈淀粉（%，占樣品干重） = -----------------×100………………………（2） m2× 5× （1-H） 式中： G——從相應(yīng)的混合校準(zhǔn)曲線或回歸方程求出的直鏈淀粉質(zhì)量，mg； m1——稱取樣品中所含粗淀粉的質(zhì)量，100mg； m2——稱取樣品的質(zhì)量，100mg； H——水分百分率。 8.2 結(jié)果表示 兩個平行測定的結(jié)果，用算術(shù)平均值表示。保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。第三位數(shù)的舍入見 GB1.1—81《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 編寫標(biāo)準(zhǔn)的一般規(guī)定》附錄 C。 8.3 結(jié)果的允許誤差 兩個平行測定值的相對誤差，不得超過 2%。 附 錄 A 馬鈴薯直鏈淀粉純品制備方法 （參考件） A.1 儀器、設(shè)備 A.1.1 離心機(jī)（4000r/min）。 A.1.2 電動攪拌器。 A.1.3 冰箱。 A.1.4 真空干燥箱。 A.1.5 磁力攪拌器。 A.1.6 232型甘汞電極或具有相同性能的其他型號。 A.1.7 213型鉑電極或具有相同性能的其他型號。 A.1.8 0-1.000V毫伏表。 A.2 試劑 除注明者外，均為分析純，水為蒸餾水。 A.2.1 氫氧化鈉（GB629—81），0.5mol·L-1水溶液。 A.2.2 鹽酸（GB622—77），1mol.L-1、1.5mol.L-1、2mol.L-1水溶液。 A.2.3 正丁醇（HG3—1012—76）。 A.2.4 異戊醇（HG3—996—76）。 A.2.5 碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取 0.1784g碘酸鉀（GB651—77，優(yōu)級純）用水溶解后，轉(zhuǎn) 入 1000ml容量瓶中用水定容，即 8.34×10-4mo1.L-1。 A.2.6 碘化鉀溶液：稱取66.40g碘化鉀（GB1272—77）用水稀釋至1000ml，即0.4moL-1。 A.3 制備方法 稱取馬鈴薯淀粉 10g，加少量無水乙醇使樣品濕潤，再加入 350m10.5mol.L-1氫氧化 鈉，放入沸水浴加熱攪拌 20min至完全分散，冷卻，以 4000r/min離心 20min，取上清液 用 1.5moI·L-1鹽酸調(diào)至 pH6.5（用 pH精密試紙），然后加入 1.1（ V/V）丁醇 -異戊醇 80ml，在沸水浴中加熱攪拌 10min，冷卻至室溫。移入冰箱內(nèi)（2-4 ）靜置 24h去掉上層 污物層，以 4000r/min離心 15min，棄掉上清液，沉淀物即為粗直鏈淀粉。 用飽和正丁醇水溶液洗滌沉淀物（粗直鏈淀粉），4000r/min離心 15min，將沉淀物 轉(zhuǎn)入 200ml飽和正丁醇水溶液中，在沸水浴中加熱溶解（10-15min），冷卻至室溫，放 入冰箱內(nèi)（2-4 ）24h，棄去上層污物層，以 4000r/min離心 15min，沉淀物再加 200ml 飽和正丁醇水溶液加熱溶解，反復(fù)純化三次。最后沉淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌離心 3- 4次，在真空干燥箱中（55-56 ）干燥。即得直鏈淀粉純品。 A.4 純品質(zhì)量鑒定 A.4.1 淀粉含量測定 稱 0.1000g純品加入 10m10.5mol·L-1氫氧化鈉在沸水浴中加熱分散，再加入21.5ml2mol ·L-1鹽酸，在沸水浴回流水解 2h，用費(fèi)林氏液法（GB5513—85《糧食、油料檢驗(yàn) 還 原糖和非還原糖測定法》）測定還原糖，乘以 0.9即得淀粉量，計(jì)算純品含量。 A.4.2 碘 -淀粉復(fù)合物吸收光譜測定 取5.4溶液 2ml（1mg/ml直鏈淀粉）及 0.09mol·L-1氫氧化鈉溶液 3ml加 50ml水稀 釋后，再加入 1mol·L-1乙酸溶液 1ml和碘試劑 1ml，用水定容至 100ml，顯色 10min，于 分光光度計(jì)測定 500-800nm的吸收譜。 A.4.3 碘結(jié)合量測定 A.4.3.1 測定 稱取重量相當(dāng)于含 0.1000g淀粉的烘干馬鈴薯直鏈淀粉純品于 100ml容量瓶中，加幾滴 無水乙醇濕潤后再加入 0.5mol·L-1氫氧化鈉溶液 10ml，置沸水浴完全分散，冷卻、加水定 容。吸 5ml（含直鏈淀粉 5mg）分散液放入 200ml燒杯中，加入 85ml水，5ml1mol·L-1鹽酸 及5ml0.4mol·L-1碘化鉀溶液，按電位滴定裝置要求，把燒杯置于電磁攪拌器上，將鉑電極 及甘汞電極插入液面下，在電磁攪拌下，用 5mi微量滴定管滴加碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，每次滴加 0.2ml（或 0.1ml），加后 1min讀取毫伏數(shù)，滴定終點(diǎn)用二次微商法計(jì)算。 A 4.3.2 計(jì)算 0.6346 直鏈淀粉碘結(jié)合量，% =-------×T×100 m 式中：m——直鏈淀粉質(zhì)量，mg； T——8.34×10-4mol·L-1碘酸鉀溶液滴定體積，ml； 0.6346——每毫升 8.34×10-4mol.L-1碘酸鉀溶液相當(dāng)于碘的質(zhì)量，0.6346mg。 A.4.4 馬鈴薯直鏈淀粉純品標(biāo)準(zhǔn) 馬鈴薯直鏈淀粉純品必須具備：a.λmax為 640-650nm；b 淀粉含量在 85%以上；c 碘結(jié) 合量在 19.5以上；d.A0.002%，λmax在 20℃時(shí)為340以上。 1cm 附 錄 B 水稻、玉米、谷子支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品的選擇與制備 （參考件） B.1 碘 -淀粉復(fù)合物吸收光譜測定 取 5.5溶液 5ml（1mg/mL支鏈淀粉），加 50ml水稀釋后，再加入 1mol·L-1乙酸溶液 1ml和碘試劑 1ml，加水至 100ml，顯色 10min，用分光光度計(jì)測定 400-640nm的吸收譜。 B.2 標(biāo)準(zhǔn)品的選擇 水稻、玉米、谷子支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品可以從相應(yīng)的蠟質(zhì)谷物品種中選擇，標(biāo)準(zhǔn)品必須 分別具備： 水稻：λmax520-530nm，A0.005%， 620nm，在20℃時(shí)為17以下； 1cm 玉米：λmax520-530nm，A0.005%， 620nm，在20℃時(shí)為25以下； 1cm 谷子：λmax530-540nm，A0.005%， 620nm，在 20℃時(shí)為22以下。 1cm B.3 標(biāo)準(zhǔn)品制備 取適量（10-20g）通過 0.177-0.149mm孔徑篩（80-100號）的蠟質(zhì)谷粉，分別 用甲醇及石油醚在索式脂肪抽提器回流脫脂 16h，放入真空干燥箱烘干（55-56℃）備 用，同時(shí)按 GB5006—85測定淀粉含量。