三苯基甲烷類染料氧化酶基因(tpmD)在大腸桿菌中的無誘導(dǎo)表達(dá)

【摘要】：為了解決嗜水氣單胞菌DN322對魚類的潛在致病性問題,有必要克隆表達(dá)該菌的三苯基甲烷染料脫色酶基因tpmD.通過PCR方法獲得該基因,并與脫色希瓦氏菌S12的NAD(P)H脫氫酶基因啟動子和用于熒光標(biāo)記的編碼CCPGCC的堿基序列融合,將有啟動子和無啟動子的融合基因片段分別連接到質(zhì)粒pMD18-T中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coliDH5α和E.coliBL21.結(jié)果發(fā)現(xiàn),有啟動子的融合基因能被E.coli在不加誘導(dǎo)物IPTG的條件下高效正確表達(dá),脫色酶活性甚至超過基因供體菌DN322.將上述兩株大腸桿菌工程菌株在自然水體中進(jìn)行孔雀石綠污染小試處理,60d內(nèi)在每個350mL反應(yīng)體系中累積共投加大于10000mg的孔雀石綠,脫色率一直保持在92%以上;細(xì)菌數(shù)量最后增加了5～10倍.研究結(jié)果證明,基因工程菌在不加營養(yǎng)物的條件下也有很強(qiáng)的脫色活性和長期的存活能力;在tpmD基因3’端加入的用于螯合雙砷熒光染料的18bp編碼氨基酸堿基序列不影響此基因的表達(dá)和酶的脫色活性,這將賦予此工程菌可示蹤性. 【作者單位】： 中國科學(xué)院南海海洋研究所;廣東省微生物研究所菌種保藏與應(yīng)用重點實驗室廣東省微生物研究所;中國科學(xué)院研究生院;廣東省科技圖書館;
【關(guān)鍵詞】： 嗜水氣單胞菌脫色酶基因(tpmD) 三苯基甲烷染料 希瓦氏菌啟動子 無誘導(dǎo)表達(dá)
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863)項目(No.2006AA06Z322) 國家自然科學(xué)基金(No.30800031) 廣東省科技計劃項目(No.2007A020903001) 廣東省科技攻關(guān)項目(No.2007A020300007) 廣東省科學(xué)院人才基金項目(No.200601) 野外科學(xué)實驗站基金項目(No.sytz200710)~~
【分類號】：Q78
【正文快照】： 1引言(Introduction)三苯基甲烷類染料孔雀石綠及其脫甲基代謝產(chǎn)物無色孔雀石綠因具有高毒性、高殘留、高致癌、高致畸、致突變等作用而引起了世人的廣泛關(guān)注(任隨周等,2006a).鑒于孔雀綠在自然環(huán)境中難以降解并且能夠在動物體內(nèi)長期殘留,如何消除孔雀綠在環(huán)境中的殘留污染已

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