蘭花組織培養(yǎng)怎么做

【專家解說】：植物組織培養(yǎng)技術(shù) 植物組織培養(yǎng)(plant tissue culture):是指在無菌條件下,將離體的植物器官(如根,莖,葉,莖尖,花,果實(shí)等),組織(如形成層,表皮,皮層,髓部細(xì)胞,胚乳等),細(xì)胞(如大孢子,小孢子,體細(xì)胞等)以及原生質(zhì)體,在人工控制的環(huán)境里培養(yǎng)成完整植株的一門生物學(xué)技術(shù). 植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù):植物細(xì)胞全能性. 植物細(xì)胞全能性(totipotency):指植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部遺傳信息,從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳能力.在適宜條件下,任何一個(gè)細(xì)胞都可以發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體. 一植物組織培養(yǎng)一些的概念 外植體(explant):在植物組織培養(yǎng)過程中,從植物體上被分離下來的,接種在培養(yǎng)基上,供培養(yǎng)用的原生質(zhì)體,細(xì)胞,組織,器官等成為外植體. 愈傷組織(callus):植物受傷后的傷口處或在植物組織培養(yǎng)中外植體切口處不斷增殖產(chǎn)生的一團(tuán)不定形的薄壁組織.愈傷組織可使傷口愈合,使表面細(xì)胞呈木栓化而起到保護(hù)作用;植物扦插時(shí),愈傷組織可形成不定根;植物嫁接時(shí),愈傷組織可使接穗和砧木愈合;在植物組織培養(yǎng)中,愈傷組織常可形成不定芽. 脫分化(dedifferentiation):指已分化的組織又恢復(fù)到無分化的狀態(tài).在組織培養(yǎng)過程中,將已經(jīng)分化的莖,葉,花等外植體進(jìn)行培養(yǎng),令其形成愈傷組織,回到?jīng)]有分化的狀態(tài),稱為脫分化. 再分化(redifferentiation):指在植物組織培養(yǎng)中,對(duì)處于脫分化狀態(tài)的愈傷組織進(jìn)行培養(yǎng),誘導(dǎo)其形成新的植物體的過程. 植株再生(plant regeneration):指通過組織培養(yǎng)技術(shù)將植物的細(xì)胞,組織,器官培養(yǎng)成完整植株的過程. 試管苗(test-tube plantlet):指在無菌條件下的人工培養(yǎng)基上,對(duì)植物細(xì)胞,組織或器官進(jìn)行培養(yǎng)所獲得的再生植株. 初代培養(yǎng)(primary culture):指在組織培養(yǎng)過程中,最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段.由于首批外植體來源復(fù)雜,攜帶較多細(xì)菌,要對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行適應(yīng),因此,初代培養(yǎng)一般比較困難. 繼代培養(yǎng)(subculture):在組織培養(yǎng)過程中,當(dāng)外植體被接種一段時(shí)間后,將已經(jīng)形成愈傷組織或已經(jīng)分化根,莖,葉,花等的培養(yǎng)物重新切割,轉(zhuǎn)接到其它培養(yǎng)基上以進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)的過程稱為繼代培養(yǎng). 運(yùn)用組織培養(yǎng)方法可以在比較簡單易觀察的條件下研究細(xì)胞,組織或器官的繁殖,生長和分化,以及各種外界因素對(duì)它們的影響,從而為解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和藥物生產(chǎn)中的某些問題開辟了廣闊的前景.目前已有若干重要成果應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中,一為營養(yǎng)繁殖系的快速繁殖,如以甘蔗為例;原來每畝要用蔗種0.5～1噸,用組織培養(yǎng)快速繁殖的幼苗進(jìn)行栽培可節(jié)省大量蔗種.又如貝母繁殖率非常低,而用組織培養(yǎng)分化出的三個(gè)月左右的鱗莖,其大小就相當(dāng)于用種子繁殖二年生的鱗莖. 另一為藥物和生物制品的工業(yè)生產(chǎn),探索天然藥物生產(chǎn)工業(yè)化的途徑是當(dāng)前藥物生產(chǎn)的一個(gè)新方向,有可能用組織培養(yǎng)法來代替全植物提取有效成分.組織培養(yǎng)應(yīng)用在藥學(xué)方面的工作雖然歷史不長,但發(fā)展很迅速,它具有如下一些優(yōu)點(diǎn): 1.利用組織培養(yǎng)代替原植物的栽培以獲得所需的有效成分,達(dá)到產(chǎn)量高,成本低的目的,還可節(jié)約土地. 2.除了應(yīng)用于產(chǎn)生次生物質(zhì)外,還可應(yīng)用于生物轉(zhuǎn)化.例如煙草組織培養(yǎng)中蒂巴因去甲基后可能生成嗎啡. 目前中國已成功地將麥角菌,靈芝,猴頭菇等真菌進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn),高等植物組織培養(yǎng)在工業(yè)化中的應(yīng)用也正在研究. 總之,植物組織培養(yǎng)這一新技術(shù)在中草藥方面應(yīng)用的前途是無限廣闊的,它不僅有利于探討和闡明藥用植物生理,遺傳和成分生物合成等一系列理論問題,而且一旦工業(yè)化生產(chǎn)問題得到解決,將可以為防病治病做出很大的貢獻(xiàn). 一,培養(yǎng)基的組成和配制法 1 培養(yǎng)基的成分 (1)無機(jī)營養(yǎng)物 (2)有機(jī)物質(zhì) (3)植物生長刺激物質(zhì) (4)其它 附加物 (5)其它對(duì)生長有益的未知復(fù)合成分:如椰子汁,酵母提取液,麥芽浸出液等. 培養(yǎng)基中如加入0.5～1%的瓊脂即為靜止培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基,否則為懸浮培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基.不同植物材料常需要改變配方,如維持生長和誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和分化的培養(yǎng)基配方就不同,因此配方的種類很多,目前以Ms (Murashige and Skoog)培養(yǎng)基配方為最常用的一種基本培養(yǎng)基,它利于一般植物組織和細(xì)胞的快速生長. 2 培養(yǎng)基的種類 MS培養(yǎng)基,B5培養(yǎng)基,White培養(yǎng)基,N6培養(yǎng)基等等. 3 培養(yǎng)基的配制 (1)混和培養(yǎng)基中的各成分 (2)融化瓊脂 (3)調(diào)整pH為5.8 (4)分裝 (5)滅菌 (6)放置備用 二組織培養(yǎng)操作的一般流程 1 器皿的洗滌 2 培養(yǎng)基的配制和滅菌 3 接種室及用具消毒 4 材料滅菌:70%酒精,氯化汞 5 接種 6 無菌培養(yǎng) 三,選材和滅菌方法 從低等的藻類到苔蘚,蕨類,種子植物等高等植物的各類,各部分都可采用作為組織培養(yǎng)的材料,一般裸子植物多采用幼苗,芽,韌皮部細(xì)胞,被子植物采用胚,胚乳,子葉,幼苗,莖尖,根,莖,葉,花藥,花粉,子房和胚珠等各個(gè)部分. 由于植物在自然條件下,表面常被霉菌和細(xì)菌污染,故材料必須進(jìn)行滅菌處理.一般用漂白粉溶液(1～10%),次氯酸鈉溶液(0.5～10%),升汞溶液(0.01%),乙醇(70%)或過氧化氫(3～10%)等處理后,再用無菌水反復(fù)沖洗至凈,然后在無菌室內(nèi),將所取的組織迅速培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基上.在適宜的條件下,受傷組織切口表面不久即能長出一種脫分化的組織堆塊,稱為愈傷組織(Callus). 四,培養(yǎng)條件 (一)溫度: 對(duì)大多數(shù)植物組織20～28℃即可滿足生長所需,其中26～27℃最適合. (二)光: 組織培養(yǎng)通常在散射光線下進(jìn)行.光的影響可導(dǎo)致不同的結(jié)果.有些植物組織在暗處生長較好,而另一些植物組織在光亮處生長較好,但由愈傷組織分化成器官時(shí),則每日必須要有一定時(shí)間的光照才能形成芽和根.有些次生物質(zhì)的形成,光是決定三因素. (三)滲透壓: 滲透壓對(duì)植物組織的生長和分化很有關(guān)系.在培養(yǎng)基中添加食鹽,蔗糖,甘露醇和乙二醇等物質(zhì)可以調(diào)整滲透壓.通常1～2個(gè)大氣壓可促進(jìn)植物組織生長,2個(gè)大氣壓以上時(shí),出現(xiàn)生長障礙,6個(gè)大氣壓時(shí)植物組織即無法生存. (四)酸堿度: 一般植物組織生長的最適宜pH為5～6.5.在培養(yǎng)過程中pH可發(fā)生變化,加進(jìn)磷酸氫鹽或二氫鹽,可起穩(wěn)定作用. (五)通氣: 懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞的旺盛生長必須有良好的通氣條件.小量懸浮培養(yǎng)時(shí)巨常轉(zhuǎn)動(dòng)或振蕩,可起通氣和攪拌作用.大量培養(yǎng)中可采用專門的通氣和攪拌裝置. 番茄無菌苗愈傷組織培養(yǎng) 1 培養(yǎng)基配制 2 接種和培養(yǎng) 接種--在無菌條件下,將滅過菌的材料,經(jīng)適當(dāng)切割,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上.