跑pcr變異系數(shù)大致在什么水平結(jié)果比較可靠

熱心網(wǎng)友：實(shí)時(shí)定量PCR (real-time quantitative PCR),簡(jiǎn)稱real-time PCR，q-pcr，q-RT-PCR等等，都是一個(gè)意思。普通PCR結(jié)果反映的其實(shí)是PCR的結(jié)果，而當(dāng)PCR經(jīng)過多倫循環(huán)到平臺(tái)期后，很難反映原來模板的濃度；而實(shí)時(shí)定量PCR 反映的是PCR的過程，它起飛時(shí)間的Ct值可以精確反映模板的濃度。定義，操作，原理什么的我就不說了，自己查百度百科和文庫，我就從實(shí)戰(zhàn)給你點(diǎn)注意事項(xiàng)吧。1 選好內(nèi)參基因，特別是同一物種不同組織中某基因的表達(dá)情況，一定要?jiǎng)e人報(bào)道過在你檢測(cè)的組織中變化不大，如果你只是拿一個(gè)別的物種中的同源基因，別人肯定會(huì)argue你的，如果有可能可以雙內(nèi)參。2 最好有標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)曲反應(yīng)擴(kuò)增效率，這樣比較準(zhǔn)確點(diǎn)，不然只能用2 delta delta t法了，有些雜志扣的話，不太好解釋。標(biāo)曲可以用cDNA來制備，還可以直接有已知模板來制（可以搜一下網(wǎng)上的標(biāo)曲制備方法）3 結(jié)果先看融解曲線，如果只有特異的單一融解峰，再去分析數(shù)據(jù)，不然沒有意義。

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