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【專家解說】：26、離子交換色譜的流動相必須是有一定離子強(qiáng)度的并且對pH有一定緩沖能力的溶液 27、1. 離子交換樹脂的預(yù)處理 （1）物理處理 預(yù)處理前要先去雜過篩，粒度過大時可稍加粉碎，粉碎后的樹脂應(yīng)篩選或浮選處理。經(jīng)篩選去除雜質(zhì)后的樹脂，還需要水洗以去除木屑、泥沙等雜質(zhì)，再用酒精或其他溶劑浸泡以去除吸附的少量有機(jī)雜質(zhì)。 （2）化學(xué)處理 化學(xué)處理的方法是用8～10倍的1mol／L的鹽酸或氫氧化鈉溶液交替攪拌浸泡，4h左右，反復(fù)用水洗至近中性后。 （3）轉(zhuǎn)型 按使用要求人為地賦予樹脂平衡離子的過程稱為轉(zhuǎn)型。常用的陽離子交換樹脂有氫型、鈉型、銨型等；常用的陰離子交換樹脂有羥型、氯型等。 2. 離子交換操作條件的選擇 （1）交換pH值 pH值是最重要的操作條件。選擇時應(yīng)考慮：在藥物穩(wěn)定的pH值范圍內(nèi)；使藥物能離子化；使樹脂能離子化。一般，對于弱酸性和弱堿性樹脂，為使樹脂能離子化，應(yīng)采用鈉型或氯型。而對強(qiáng)酸性和強(qiáng)堿性樹脂，可以采用任何形式。若抗生素在酸性、堿性條件下易破壞，則不宜采用氫型和羥型樹脂。對于偶極離子，應(yīng)采用氫型樹脂吸附。 （2）洗滌 離子交換后，洗脫前樹脂的洗滌對分離質(zhì)量影響很大。洗滌的目的是將樹脂上吸附的廢液及夾帶的雜質(zhì)除去。適宜的洗滌劑應(yīng)能使雜質(zhì)從樹脂上洗脫下來，不與有效組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。目前生產(chǎn)中使用軟水進(jìn)行洗滌，常用的洗滌劑有軟化水、無鹽水、稀酸、稀堿、鹽類溶液或其他絡(luò)合劑等。 3. 裝柱及上樣 離子交換劑的裝柱與一般柱色譜技術(shù)相同．主要是防止出現(xiàn)氣泡和分層，裝填要均勻。防止產(chǎn)生氣泡和分層的方法是裝柱時柱內(nèi)先保持一定高度的起始洗脫液（一般為柱高的1／3），加入樹脂時使樹脂借水的浮力慢慢自然沉降。裝柱完畢后，用水或緩沖液平衡到所需的條件，如特定的pH、離子強(qiáng)度等。 上樣是指將溶解在少量溶劑（通常為展開劑）中的試樣加到色譜柱中，使被交換物質(zhì)從料液中交換到樹脂上的過程，分正交換法和反交換法兩種。正交換是指料液自上而下流經(jīng)樹脂，此交換方法有清晰的離子交換帶，交換飽和度高，洗脫液質(zhì)量好，但交換周期長，交換后樹脂阻力大，影響交換速率。反交換是指料液自下而上流經(jīng)樹脂層，樹脂呈沸騰狀，所以對交換設(shè)備要求比較高。生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)料液的黏度及工藝條件選擇，大多采用正交換法。在離子交換操作時必須注意，樹脂層之上應(yīng)保持有液層，處理液的溫度應(yīng)在樹脂耐熱性允許的最高溫度以下，樹脂層中不能有氣泡。 上柱的一個重要問題是控制流速的加壓或減壓裝置，尤其是采用細(xì)長柱或細(xì)目交換劑時，壓力控制非常重要。加壓法是用打氣入柱的方式進(jìn)行加壓，可用一個裝有樣品的分液漏斗與柱用橡皮塞連接．分液漏斗上端串有壓力計并經(jīng)緩沖瓶與打氣管相連，當(dāng)達(dá)到所需壓力后就將打氣管夾緊。減壓法是在柱的排出口增設(shè)抽氣裝置，工業(yè)上多采用此法。 3．洗脫 完成離子交換后，將樹脂吸附的物質(zhì)釋放出來重新轉(zhuǎn)入溶液的過程稱作洗脫。洗脫劑可選用酸、堿、鹽、溶劑等。洗脫劑應(yīng)根據(jù)樹脂和目的藥物的性質(zhì)來選擇。對于強(qiáng)酸性樹脂，一般選擇氨水、甲醇及甲醇緩沖液等作為洗脫劑；弱酸性樹脂用稀硫酸、鹽酸等作為洗脫劑；強(qiáng)堿樹脂用鹽酸-甲醇、乙酸等作為洗脫劑。若被交換的物質(zhì)用酸、堿洗不下來，或遇酸、堿易破壞，可以用鹽溶液作洗脫劑，此外還可以用有機(jī)溶劑作洗脫劑。 洗脫過程是交換的逆過程，一般情況下洗脫條件應(yīng)與交換條件相反。洗脫流速應(yīng)大大低于交換時的流速。為防止洗脫過程pH值的變化對藥物穩(wěn)定性的影響，可選用氨水等較緩和的洗脫劑，也可選用緩沖溶液作為洗脫劑。若單靠pH值變化洗脫不下來，可以使用有機(jī)溶劑，選擇有機(jī)溶劑的原則是能與水混溶，并且對抗生素溶解度較大。 洗脫過程中，洗脫液的pH值和離子強(qiáng)度可以始終不變，也可以按分離的要求人為地分階段改變其pH值和離子強(qiáng)度，這就是階段洗脫，常用于多組分分離。這種洗脫液的改變也可以通過儀器來完成，稱為連續(xù)梯度洗脫。所用儀器稱作梯度混合儀。梯度洗脫的效果優(yōu)于階段洗脫，特別適用于高分辨率的分析目的。另，常對不同濃度的洗脫液進(jìn)行分步收集，以獲較高的分離效果。 4. 樹脂的再生 （1）樹脂的再生和轉(zhuǎn)型 所謂樹脂的再生就是讓使用過的樹脂重新獲得使用性能的處理過程，包括除去其中的雜質(zhì)和轉(zhuǎn)型。離子交換樹脂一般可重復(fù)使用多次，但需進(jìn)行再生處理。對使用后的樹脂首先要去雜質(zhì)，即用大量的水沖洗，以去除樹脂表面和孔隙內(nèi)部物理吸附的各種雜質(zhì)；然后再用酸、堿處理，除去與功能基團(tuán)結(jié)合的雜質(zhì)，使其恢復(fù)原有的靜電吸附能力。 常用的再生劑有1％～10％HCI、H2S04、NaCl、NaOH、Na2C03及NH40H等。?？刂圃偕潭仍?0％～90％。 再生可在柱外或柱內(nèi)進(jìn)行，分別稱為靜態(tài)再生法和動態(tài)再生法。前者是將樹脂放在一定容器內(nèi)，加入一定濃度的適量再生劑浸泡或攪拌一段時間后，水洗至中性，動態(tài)再生法是在柱中進(jìn)行，其操作同靜態(tài)再生法。動態(tài)再生法既可采用順流（與洗脫流向相同）再生，也可采用逆流（與洗脫流向相反）再生。順流再生未再生完全的樹脂在床層的底部，殘留離子會影響分離效果；逆流再生床層底部的樹脂再生程度最高，分離效果穩(wěn)定。 28、交聯(lián)度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，吸水量越小，吸水后體積膨脹越少；反之，交聯(lián)度越小，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越疏松，吸水量越多，吸水后體積膨脹越大。凝膠的型號就是根據(jù)吸水量而來，如G 25的吸水量（1 g干膠所吸收水分）為2 5 mL，型號數(shù)字相當(dāng)于吸水量乘以10。 29、選擇合適的凝膠過濾介質(zhì)應(yīng)從分離目的和需要分離物質(zhì)的分子大小兩個方面進(jìn)行考慮。 30、 問答題： 1、生物材料的預(yù)處理過程的具體步驟有哪些？ 生物物質(zhì)分離純化的第一個必需步驟就是從生物材料出發(fā)，設(shè)法使所制備的目標(biāo)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到溶液中，同時去除其他懸浮顆粒（如培養(yǎng)基殘渣、菌體、細(xì)胞或絮凝體等）以及改善溶液的性狀，以利后續(xù)各步操作，該過程通常稱預(yù)處理。 生物材料的預(yù)處理過程的具體步驟 1．動物組織和器官要先除去結(jié)締組織、脂肪等非活性部分，然后絞碎，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┬纬杉?xì)胞懸液 2．植物組織和器官要先去殼、除脂，再粉碎，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┬纬杉?xì)胞懸液。 3．發(fā)酵液、細(xì)胞培養(yǎng)液、組織分泌液以及制成的細(xì)胞懸液等則根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物所處位置不同進(jìn)行相應(yīng)的處理。對于胞外產(chǎn)物，一般可直接利用過濾或離心方法，將菌體或其他懸浮雜質(zhì)分離除去。對于胞內(nèi)產(chǎn)物，則應(yīng)首先通過離心等方法收集細(xì)胞或菌體，經(jīng)細(xì)胞破碎使生物物質(zhì)釋放到液相中，再將細(xì)胞碎片分離除去。