如何檢驗(yàn)環(huán)境水中的微生物？

【專家解說(shuō)】：首 頁(yè) 食品資訊 政策法規(guī) 生產(chǎn)技術(shù) 質(zhì)量管理 檢驗(yàn)技術(shù) 儀器設(shè)備 食品標(biāo)準(zhǔn) 資料中心 食品圖庫(kù) 食品人才 食品安全 食品課堂 專業(yè)英語(yǔ) 食品專題 食品網(wǎng)刊 食品網(wǎng)址 食品百科 個(gè)人空間 食品論壇 水質(zhì)微生物 一、水質(zhì)微生物及指示菌 在各種水體，特別是污染水體中存在有大量的有機(jī)物質(zhì)，適于各種微生物的生長(zhǎng)，因此水體是僅次于土壤的第二種微生物天然培養(yǎng)基。水體中的微生物主要來(lái)源于土壤，以及人類的動(dòng)物的排泄物及污染。水體中微生物的數(shù)量和種類受各種環(huán)境條件的制約。 一般認(rèn)為，水中微生物以革蘭氏陰性桿菌占有較大優(yōu)勢(shì)。與其他水體相比，河水及溪水中革蘭氏陽(yáng)性菌相對(duì)較多，這是因?yàn)殛懙匚⑸餂_洗污染的緣故。 水體中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是從外界環(huán)境污染而來(lái)，特別是人和其它溫血?jiǎng)游锏募S便污染。水中常見的致病性細(xì)菌主要包括：志賀氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、小腸結(jié)炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌等。 在實(shí)際控制中，對(duì)水質(zhì)衛(wèi)生質(zhì)量的評(píng)價(jià)和控制，是無(wú)法對(duì)各種可能存在的致病微生物一一進(jìn)行檢測(cè)，而一般利用對(duì)指示菌的檢測(cè)和控制，來(lái)了解水體是否受到過(guò)人畜糞便的污染，是否有腸道病原微生物存在的可能，從而評(píng)價(jià)水的質(zhì)量，以保證水質(zhì)的衛(wèi)生安全。 目前，世界各國(guó)一般認(rèn)為大腸菌群是指示水質(zhì)受糞便污染較好的指示菌。 我國(guó)水質(zhì)控制也采用大腸菌群作為指示菌，GB5749-85《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，生活飲用水中大腸菌群每升不得超過(guò)3個(gè)。 在某些情況下，水體中的細(xì)菌總數(shù)也可指示水體受糞便等污染物污染的情況。這里的細(xì)菌總數(shù)其實(shí)是指營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)后形成的菌落總數(shù)。目前世界各國(guó)對(duì)于控制飲用水的衛(wèi)生質(zhì)量，除采用大腸菌群等指標(biāo)外，一般還采用細(xì)菌總數(shù)這個(gè)指標(biāo)。我國(guó)GB5749-85《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定生活飲用水細(xì)菌總數(shù)每毫升不得超過(guò)100個(gè)。 二、水質(zhì)微生物檢驗(yàn)方法 GB5750-85《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法》提供了水質(zhì)中細(xì)菌總數(shù)和總大腸菌群的檢測(cè)方法。 （一）細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)： 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，細(xì)菌總數(shù)是指1ml水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后，所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落的總數(shù)。 對(duì)生活飲用水，直接吸取1ml水樣于平皿中，加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂后混勻，37℃培養(yǎng)24h，進(jìn)行計(jì)數(shù)。 對(duì)水源水，根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行10倍梯度稀釋，選擇適宜稀釋液1ml，加注平皿，營(yíng)養(yǎng)瓊脂混勻，37℃培養(yǎng)24h，進(jìn)行計(jì)數(shù)。 按照規(guī)定格式報(bào)告每毫升水中細(xì)菌總數(shù)。 （二）總大腸菌群的檢測(cè)： 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，利用總大腸菌群作為糞便污染的指標(biāo)?？偞竽c菌群是指一群需氧及兼性厭氧的，37℃生長(zhǎng)時(shí)能使乳糖發(fā)酵，在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。水樣中總大腸菌群數(shù)的含量，表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)提供了多管發(fā)酵法及濾膜法檢測(cè)總大腸菌群的方法。 多管發(fā)酵法檢測(cè)總大腸菌群，分為三步：初發(fā)酵試驗(yàn)，平板分離，復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)。初發(fā)酵試驗(yàn)，采用乳糖蛋白胨培養(yǎng)液37℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。對(duì)陽(yáng)性管培養(yǎng)物，接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，觀察菌落特征，并進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。對(duì)典型和可疑菌落，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，進(jìn)行復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)所附檢數(shù)表報(bào)告結(jié)果。 其中，對(duì)生活飲用水，初發(fā)酵試驗(yàn)接種水樣總量300ml，即100ml接種2管，10ml接種10管，采用兩個(gè)稀釋度，12支發(fā)酵管。對(duì)水源水，初發(fā)酵試驗(yàn)接種水樣總量55.5ml，即10ml接種5管，1ml接種5管，0.1ml接種10管，共采用三個(gè)稀釋度，15支發(fā)酵管。兩種接種方法，所用的檢數(shù)表是不同的。 濾膜法檢測(cè)總大腸菌群，就是利用微孔濾膜，過(guò)濾一定量水樣，將水樣中含有的細(xì)菌截留在濾膜上，然后將濾膜帖放在選擇性培養(yǎng)基上（如品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基），經(jīng)培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)后，直接計(jì)數(shù)濾膜上生長(zhǎng)的典型大腸菌群菌落，并計(jì)算出每升水樣中含有的總大腸菌群數(shù)。 三、說(shuō)明： 1．菌落總數(shù)測(cè)定中，應(yīng)選擇合適的稀釋度進(jìn)行。生活飲用水，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過(guò)100個(gè)，因此可以直接吸取1毫升到平板進(jìn)行培養(yǎng)。 2．培養(yǎng)時(shí)間。與食品中菌落計(jì)數(shù)不同，測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)，培養(yǎng)時(shí)間采用24h。 3．總大腸菌群的測(cè)定方法，由于飲用水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接種量，檢數(shù)表也不相同。 4．當(dāng)接種量超過(guò)1毫升時(shí)，一般采用多倍濃度培養(yǎng)液。如配制3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液50mL，加入100mL水樣后，總體積為150mL，培養(yǎng)液恢復(fù)到正常濃度。 5．濾膜法檢測(cè)總大腸菌群，一般在檢測(cè)較大量低濁度水樣時(shí)采用，大量水樣濾過(guò)濾膜后，水中所含有的所有細(xì)菌均截留在濾膜上。