色譜分離制備薄板時(shí)要注意什么

【專家解說】：薄層板的制備是將吸附劑涂布在大小適當(dāng)?shù)拇靼迳希纬梢欢ê穸鹊谋∧?。制備一定?guī)格的薄層板，是保證獲得滿意的分離效果及良好的Rf值重現(xiàn)性必不可少的條件。具體制備方法及有關(guān)問題分別討論如下： （一）載板：戴板應(yīng)對各種展開溶劑、化學(xué)顯色試劑以及溫度都具有穩(wěn)定性，同時(shí)又應(yīng)有一定的機(jī)械強(qiáng)度以便重復(fù)使用。常用的戴板中，以玻璃最好，一般玻璃只要表面平整光滑，厚度在2—4厘米，允差±0.1—0.2毫米即可。戴板大小無絕對規(guī)定，由斯塔爾推薦的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格為20×20厘米、20×10厘米。作為一般簡單的快速薄層分離，也可用顯微鏡戴玻片作戴板。至于制備薄層色譜，所用戴板可達(dá)20×100厘米。戴板應(yīng)非常干凈，才能保證良好的粘著效果。故玻板應(yīng)先用肥皂水洗凈，再在重鉻酸洗液內(nèi)浸泡，然后清洗干凈，最后用蒸餾水淋洗，晾干后備用。玻璃板的缺點(diǎn)是不易保存。 其他材料的戴板中，最常用的為塑料板。塑料戴板制備薄層板操作復(fù)雜，因此多為成品薄層板出售。其優(yōu)點(diǎn)為使用簡便，缺點(diǎn)為高溫下抗腐蝕性差。其他如不銹鋼板也有應(yīng)用。 （二）吸附劑糊的配制：在選擇好適當(dāng)?shù)拇靼搴?，?yīng)根據(jù)需要，制備一定粘度的吸附劑勻漿供制備薄層板用。常用各種吸附劑糊的調(diào)制方法如下： （1）硅膠 1）加石膏粘合劑：取硅膠G20克，置于玻璃乳缽中，將40毫升蒸餾水分兩次加入，第一次加入30—35毫升，充分研磨后，再加入剩余的水。迅速小心研磨，直至開始出現(xiàn)凝膠狀，立即鋪板。吸附劑的加水量和加水后的攪拌時(shí)間相當(dāng)重要，是制備薄層板成敗的關(guān)鍵。若加水量過多，則吸附劑不易膠化；過少則膠化過快造成涂布困難。攪拌時(shí)間無具體規(guī)定，一般在45—65秒左右，以吸附劑開始出現(xiàn)凝膠狀態(tài)時(shí)為佳，此時(shí)粘度增大，光澤潔白；超過此時(shí)則凝膠固化，不易涂布。目前不同廠牌及批號(hào)的吸附劑加水量及攪拌時(shí)間都有所不同，可以根據(jù)具體情況選擇最佳條件。（其他無機(jī)吸附劑如氧化鋁G、硅藻土G的制備方法與硅膠G相似） 2）加淀粉粘合劑：一般是在吸附劑中加入約5%的淀粉及二倍量的水，在沸水浴上加熱，不斷攪拌至呈一定的粘稠度，進(jìn)行鋪板。 3）加羥甲基纖維素粘合劑：通常取硅膠55克或氧化鋁60—80克，加1%羥甲基纖維素水溶液100毫升，調(diào)成糊狀，進(jìn)行鋪板。 （2）纖維素粉 1）天然纖維素粉：配成15%的纖維素水懸浮液，在電磁攪拌器上混合30—60秒鐘，纖維素粉不需加任何粘合劑，即可鋪板。 2）微結(jié)晶纖維素粉：配制成15%—30%的水懸浮液，電磁攪拌器上充分混合1分鐘，即可鋪板。攪拌過久可能形成凝膠而失敗。 3）乙?；w維素粉：根據(jù)纖維素乙?；某潭炔煌?，稱取適量，加95%乙醇，充分?jǐn)嚢韬箐伆濉?（3）聚酰胺粉 取聚酰胺粉12克，加甲醇50毫升，用力充分振搖后鋪板。若加入2。5克纖維素粉及40毫升甲醇，在電磁攪拌器上混合成漿，可制成堅(jiān)固的薄層板。 （4）離子交換劑 1）離子交換樹脂：取5克纖維素MN300加少量水?dāng)嚢鑾追昼?，再?0—30毫升蒸餾水，繼續(xù)攪拌，加30克Dowex50樹脂，最后加25毫升水，鋪板。 2）離子交換纖維素：用蒸餾水配制成10—20%離子交換纖維素，按一般吸附劑鋪板法進(jìn)行鋪板，粘著效果良好。 （三）薄層板制備：薄層板的制備方法，目前常用的有浸漬法、傾注法、噴霧法及涂布法。其中最常用的方法為涂布法。各法簡述如下： （1）浸漬法：用于小型薄層板的制備，如戴玻片板。所用的吸附劑糊，最好用有機(jī)溶劑來配制，如氯仿-丙酮或氯仿-甲醇混合液。將兩張玻片背靠背地貼緊，放在吸附劑糊中浸漬，取出后放在水平板上，即可在玻片上形成薄層。 （2）傾注法：與浸漬法類似，操作簡便，不需特殊儀器。將一定量的吸附劑糊，均勻地傾注在玻片上，再入置水平板上，使其形成厚度較為均勻的薄層。 （3）噴霧法：采用氣體壓力噴霧方法，將吸附劑糊均勻地噴灑在玻片上，形成一層薄層。 （4）涂布法：本法為實(shí)驗(yàn)室最常用的薄層板制備法。薄層涂布器由涂布臺(tái)及涂布儀二者組成，有商品出售。也可以自制，基本結(jié)構(gòu)如圖4—1，材料可用不銹鋼或有機(jī)玻璃。圖4—2為一種自制的簡易涂布器。這種涂布器有一個(gè)活動(dòng)的閘板，涂布時(shí)吸附劑從閘板下的縫隙流出，涂在載板上。根據(jù)薄層厚度的要求不同，可制成多種規(guī)格縫隙的閘板，以便調(diào)換。一般有250、275、500、750、1000和2000微米等規(guī)格的閘板。 商品涂布器種類較多，最常用的為斯塔爾型涂布器。涂布法制備薄層板易精確控制厚度，是其最大的優(yōu)點(diǎn)。其他三種方法都具有不易控制薄層厚度的缺點(diǎn)。 （四）薄層板的活化與貯存：吸附薄層色譜的薄層板，首先應(yīng)具有一定的吸附活性，才能達(dá)到良好的分離效果。薄層板的活度與吸附劑中水份含量有關(guān)，水份含量高，則活度減弱。因此，為達(dá)到某一規(guī)定的吸附活度，就應(yīng)加溫除去薄層中的水份。這一過程稱為薄層板的活化，其操作為：將涂布后的薄層板在常溫下放置15—20分鐘，使水份蒸發(fā)、吸附劑凝固。這一過程中薄層板有如下現(xiàn)象： （1）開始薄層板表面有閃亮光澤。 （2）幾分鐘后光澤消失。 （3）最后薄層凝固，顏色變白，水份蒸發(fā)約50%。 薄層板的活度級(jí)可用標(biāo)準(zhǔn)色素測定，其方法如下： （1）硅膠薄層板的活度測定：稱取標(biāo)準(zhǔn)色素奶油黃、蘇丹紅及靛酚藍(lán)各40毫克，溶于100毫升苯中，將此混合溶液點(diǎn)于已活化的薄層板上，用正已烷或石油醚展開10厘米，所有色素均應(yīng)停留在原點(diǎn)；而用苯展開10厘米時(shí)，則應(yīng)分離成三個(gè)清晰的斑點(diǎn)。其Rf值應(yīng)分別為：奶油黃0.58，蘇丹紅0.19，靛酚藍(lán)0.08。而且展開溶劑前沿的上升速度應(yīng)在30分鐘移動(dòng)10厘米。 （2）氧化鋁板的活度測定：稱取偶氮苯30毫克，對甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅及對氨基偶苯各20毫克，分別溶于50毫升四氯化碳中，并各取10微升點(diǎn)于已活化的氧化鋁板上，用四氯化碳為展開溶劑，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)色素的Rf值（下表），查出其活度級(jí)。