如何判斷飲用水是否受到糞便污染？用什么方法檢測(cè)？判斷標(biāo)準(zhǔn)如何?

【專(zhuān)家解說(shuō)】：生活飲用水受糞便污染最直接的指標(biāo)肯定是大腸桿菌的數(shù)量，當(dāng)然糞便中肯定含有COD、BOD等指標(biāo)，不過(guò)大腸桿菌的數(shù)量已經(jīng)足夠說(shuō)明問(wèn)題。 其中的標(biāo)準(zhǔn)是《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749-2006） 大腸桿菌的監(jiān)測(cè)方法有相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)： 大腸菌群測(cè)定的操作細(xì)則 大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。該菌主要來(lái)于人畜糞便,故以此作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。 食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示。 1 設(shè)備和材料 1.1 溫箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。 1.3 恒溫水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 顯微鏡。 1.6 均質(zhì)器或乳缽。 1.7 平皿:直徑為90mm。 1.8 試管。 1.9 吸管。 1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。 1.11 玻璃珠:直徑約5mm。 1.12 載玻片。 1.13 酒精燈。 1.14 試管架。 2 培養(yǎng)基和試劑 2.1 乳糖膽鹽發(fā)酵管:按GB 4789.28中4.9規(guī)定。 2.2 伊紅美藍(lán)瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規(guī)定。 2.3 乳糖發(fā)酵管:按GB 4789.28中4.10規(guī)定。 2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規(guī)定。 2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規(guī)定。 2.6 生理鹽水。 2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規(guī)定。 3 操作步驟 3.1 檢樣稀釋 3.1.1 以無(wú)菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。 3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。 3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。 3.1.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì),選擇三個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度,接種3管。 3.2 乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 將待檢樣品接種于乳糖 膽鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)24±2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn)行。 3.3 分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)18-24h,然后取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。 3.4 證實(shí)試驗(yàn) 在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置 36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌,即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。 3.5 報(bào)告 根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù),查MPN檢索表,報(bào)告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。 4 糞大腸菌群(faecal coliform) 4.1 用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物(見(jiàn)3.2條)轉(zhuǎn)種于EC肉湯管內(nèi),置44.5±0.2℃水浴箱內(nèi)(水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于EC肉湯液面),培養(yǎng)24±2h,經(jīng)培養(yǎng)后,如所有EC肉湯管均不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為陰性;如有產(chǎn)氣者,則將所有產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,置 培養(yǎng)18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。 4.2 結(jié)果報(bào)告 根據(jù)證實(shí)為糞大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù),查MPN檢索表,報(bào)告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。