求液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在環(huán)境污染物分析中的應(yīng)用的論文5000字左右

【專家解說】：反相高效液相色譜法測(cè)定人血漿中單硝酸異山梨酯的濃度 論文 　　單硝酸異山梨酯（isosorbide mononitrate，ISMN）為硝酸異山梨酯的主要活性代謝產(chǎn)物。可通過擴(kuò)張外周血管，特別是增加靜脈血容量，減少回心血量，降低心臟前后負(fù)荷，從而減少心肌耗氧量；同時(shí)還可以促進(jìn)心肌血流重新分布，改善缺血區(qū)血流供應(yīng)，單硝酸異山梨酯可能通過這兩方面發(fā)揮抗心肌缺血作用。目前國(guó)內(nèi)復(fù)方單硝酸異山梨酯緩釋片上市不久，為考察其相對(duì)生物利用度及了解藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，本文建立了測(cè)定血漿中單硝酸異山梨酯的反相高效液相色譜法。有關(guān)血中單硝酸異山梨酯的測(cè)定，文獻(xiàn)報(bào)道有氣相色譜-電子捕獲法［1～3］，高效液相色譜法［4～6］，而反相高效液相色譜法報(bào)道少見。本研究建立簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確的RP-HPLC法，可廣泛用于復(fù)方單硝酸異山梨酯緩釋制劑生物利用度和藥代動(dòng)力學(xué)的測(cè)定以及治療藥物監(jiān)測(cè)。 　　1 儀器與試藥 　　1.1 儀器 Agilent-1100高效液相色譜分析儀，配備G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器和G1315BDAD檢測(cè)器，Agilent色譜工作站。 　　1.2 色譜條件 色譜柱：預(yù)柱Ultrasphere C18柱（5 μm，4.6 mm×45 mm），分析柱Ultrasphere C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：甲醇-正己烷-乙腈（90∶6∶4，pH=7.4），流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，靈敏度為0.01 AUFS。 　　1.3 藥品與試劑 單硝酸異山梨酯（河南天方藥業(yè)有限公司）；卡馬西平（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。乙腈、正己烷為色譜純，甲醇為分析純。 　　1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱取單硝酸異山梨酯10.0 mg及卡馬西平10.0 mg，分別置于2個(gè)50 ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度即成單硝酸異山梨酯和內(nèi)標(biāo)卡馬西平貯備液（200 mg/L），-20 ℃保存可穩(wěn)定2個(gè)月，臨用時(shí)將貯備液用重蒸水稀釋至所需濃度，即得單硝酸異山梨酯系列工作液（8000，4000，2000，1000，500，250，125 μg/L）和內(nèi)標(biāo)稀釋液（126 μg/L）。 　　2 方法與結(jié)果 　　2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 取正常人空白血漿各0.5 ml共7份，分別加入單硝酸異山梨酯標(biāo)準(zhǔn)系列工作液100 μl，使各管血漿濃度分別為1600，800，400，200，100，50，25 μg/L，再分別加入內(nèi)標(biāo)稀釋液100 μl，0.25 mol/L氫氧化鈉溶液100 μl，混勻后用乙醚5.0 ml渦旋混合萃取3 min，離心（2500 r/min）10 min，小心將有機(jī)相4 ml移至另一尖底離心管內(nèi)，置于40 ℃水浴中氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)苡?00 μl流動(dòng)相，取20 μl進(jìn)樣。由單硝酸異山梨酯與卡馬西平的峰面積比（Y）對(duì)單硝酸異山梨酯濃度（X）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為:Y=0.2297＋0.5586 X（r=0.999，n=7），表明在血藥濃度25～1600 μg/L范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。 　　2.2 樣品測(cè)定 取受試者血漿樣品0.5 ml，加入重蒸水100 μl，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下操作，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出各樣品中單硝酸異山梨酯濃度。 　　2.3 保留時(shí)間及檢測(cè)限 空白及樣品血漿色譜圖（見圖1）中單硝酸異山梨酯及內(nèi)標(biāo)卡馬西平的保留時(shí)間分別為6.8 min和8.4 min（分離度為2.0）。單硝酸異山梨酯的最低檢出量為2 ng，最低檢出濃度為10 μg/L（以信噪比≥3計(jì)）。 　　2.4 方法精密度 取含單硝酸異山梨酯高、中、低3種濃度的樣品，于同日內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次，精密度分別為1.5%、2.06%、3.10%；4日內(nèi)重復(fù)測(cè)定5次，精密度分別為3.61%、3.98%、4.27%。 　　2.5 方法回收率 取空白血漿3份，配成含單硝酸異山梨酯高、中、低3種濃度的樣品，每個(gè)濃度樣品分成5份按前述樣品測(cè)定法測(cè)定，計(jì)算方法回收率分別為97.0%、98.1%、102.1%。 　　圖1 色譜圖　略 　　3 討論 　　3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 單硝酸異山梨酯無明顯紫外吸收峰，僅在近紫外區(qū)有吸收（見圖2），為提高檢測(cè)靈敏度，檢測(cè)波長(zhǎng)應(yīng)越短越好，但由于流動(dòng)相在近紫外區(qū)吸收明顯增高，綜合二者因素，本文采用220 nm測(cè)定既不使流動(dòng)相本底吸收太高（本底吸收值0.50），又能達(dá)到測(cè)定血漿中單硝酸異山梨酯靈敏度要求。 　　圖2 單硝酸異山梨酯紫外吸收曲線　略 　　3.2 萃取條件選擇 按趙弈等報(bào)道［3］，在pH 7.0緩沖液存在下用乙酸乙酯提取，紫外檢測(cè)雜質(zhì)峰較多。本文用乙醚提取，回收率與乙酸乙酯相當(dāng)，但雜質(zhì)峰較少，且在堿性條件下提取比中性條件下雜質(zhì)峰更少。 　　本文建立的測(cè)定血漿中單硝酸異山梨酯的反相高效液相色譜法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，能滿足藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度研究的需要，已用于復(fù)方單硝酸異山梨酯緩釋片的生物利用度和藥代動(dòng)力學(xué)的測(cè)定以及治療藥物監(jiān)測(cè)（待發(fā)表），結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為單硝酸異山梨酯人血漿中濃度測(cè)定提供了一種新的選擇。