柱層析的注意事項(xiàng)有哪些

【專家解說(shuō)】：1 裝柱。 柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。 干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊 密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě) 的都是不能見(jiàn)到氣泡，我覺(jué)得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣泡就 全下來(lái)了。當(dāng)然假如你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是 開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！ 2 加樣。 用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開(kāi)，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再 加少量的低極性溶劑，然后俅蚩釗绱肆餃危話閌⑸熬突臼前咨牧恕? 加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了） ，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。 3 淋洗劑的選擇。 感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開(kāi)，過(guò) 柱子就用那種極性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不輕易在柱子上分開(kāi)，因?yàn)橹邮且? 個(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。 4 樣品的收集。 用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以假如樣品與硅膠的吸附比 較強(qiáng)的話，就不輕易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以 采用氧化鋁作固定相。 另外，收集的試管大小要以樣品量而定，非凡是小量樣品，假如用大試管，可能一根就 收到了三個(gè)樣品，wuwu。假如都用小試管那工作量又太大。 5 最后的處理。 柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以假如想送 分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒(méi) 了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。 另外，再過(guò)柱的時(shí)候，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡，一是 和使用的溶劑有關(guān)，假如是易揮發(fā)的溶劑，如乙醚、二氯甲烷等，在 室溫稍高的情況下，很輕易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此，在室溫高的時(shí)候， 可以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對(duì)小的溶劑。還有，使用混合溶劑時(shí)，使用 的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而 乙醚卻要選擇30－60的石油醚。二是：不論是用帶砂板的還是塞棉花的， 在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避免柱中有 空氣！過(guò)柱子需要耐心，不要著急。