葡萄籽中提取原花色素并進(jìn)行其含量測(cè)定的詳細(xì)步驟

【專家解說】：原花色素在自然界中廣泛分布于油菜籽、葡萄、 藍(lán)莓、櫻桃、李子、落葉松、野楊梅等植物的皮中, 因其具有獨(dú)特的功能, 被用于醫(yī)藥、化妝品和保健食 品。葡萄籽是葡萄酒、葡萄汁生產(chǎn)中的副產(chǎn)物, 常常 作飼料或垃圾被扔掉, 造成了資源的浪費(fèi)和環(huán)境的污 染。因此, 本文探討了利用葡萄籽提取原花色素工藝。 1 材料與方法 1 . 1 試驗(yàn)材料 葡萄籽、無水乙醇( AR ) 、甲醇( AR ) 、丙酮 ( AR ) 、濃鹽酸( AR ) 、香草醛( AR ) 、石油醚( AR ) 、 原花色素標(biāo)準(zhǔn)品( AR ) 。 1 . 2 儀器設(shè)備 粉碎機(jī)、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、電子天平、 超聲波振蕩器、真空干燥箱、真空泵。 1 . 3 原花色素制備方法 葡萄籽洗凈晾干, 粉碎, 石油醚脫脂備用。稱取 5g 經(jīng)脫脂的葡萄籽干粉置于燒杯中, 加入25 mL 70 % 濃度乙醇水溶液, 將燒杯放入超聲波振蕩器, 振 蕩10 min 后, 將燒杯中葡萄籽粉的乙醇水溶液全部移 入三口燒瓶, 攪拌( 攪拌速度不要太快) , 加熱升溫至 70℃, 恒溫60 min 后, 趁熱過濾, 收集濾液、濾渣。 將濾渣置于三口燒瓶, 加入溶劑, 按第一次提取條件 進(jìn)行第二、第三次提取, 70% 乙醇水用量均為22.5 mL, 提取時(shí)間均為30 min , 收集每次濾液。合并三次濾液 進(jìn)行蒸餾、干燥即得原花色素產(chǎn)品。 1 . 4 原花色素含量測(cè)定 ( 1 ) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置。準(zhǔn)確稱取10.4mg 原花色素 化學(xué)對(duì)照品, 用無水乙醇溶解, 并準(zhǔn)確定容至100mL, 配制成濃度為104.0μg / mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。 ( 2 ) 原花色素吸光度與波長(zhǎng)關(guān)系測(cè)定。 原花色素在280 nm 處有惟一特征吸收峰。 3 ) 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。分別移取上述原花色素標(biāo)準(zhǔn) 液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL 于10 mL 刻度試管中, 加入無水乙醇定容至10 mL , 塞緊后 充分搖勻, 得濃度分別為10 . 4 μg / mL 、20 . 8 μg / mL 、 31 . 2 μg / mL 、41 . 6 μg / mL 、52 . 0μg / mL 標(biāo)準(zhǔn)系列溶 液。在280 nm 處以無水乙醇作空白調(diào)零扣除背景 值, 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液吸光值, ( 4 ) 原花色素含量測(cè)定。準(zhǔn)確稱取20 mg ( 精確至 0.1mg) 干葡萄籽提取物, 以無水乙醇定容至100 mL, ( 對(duì)于醇溶性較差的樣品, 可加少量水溶解后再用無水 乙醇定容, 必要時(shí)以4 000 r / min 的轉(zhuǎn)速離心10 min , 取上層清液2mL, 用無水乙醇稀釋定容至10 mL) , 搖 勻, 按上述方法測(cè)定樣品吸光度, 并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線找 出對(duì)應(yīng)的原花色素濃度, 計(jì)算原花色素純度和提取率。