硅膠柱層析的溶液要收集到管內(nèi)溶液流完嗎

【專家解說】：硅膠柱層析的原理
利用吸附原理，即利用硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異，而使混合物中各成分得以分離的色譜方法。
硅膠柱層析的操作方法及注意事項 ：
裝柱
操作要點：裝柱前柱底要墊一層脫脂棉以防吸附劑外漏。 有干法裝柱和濕法裝柱兩種方法
（1）干法裝柱：將硅膠通過漏斗裝入柱內(nèi)，中間不應(yīng)間斷，形成一細(xì)流慢慢加入管內(nèi)。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后，打開下端活塞，然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內(nèi)空氣，并保持一定液面。
（2）濕法裝柱：將最初準(zhǔn)備使用的洗脫劑裝入柱內(nèi)，打開下端活塞，使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內(nèi)（或?qū)⒐枘z與適量洗脫劑調(diào)成混懸液慢慢加入柱內(nèi)，），硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動，在柱內(nèi)自由沉降，此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內(nèi)保持一定的液面，直至把硅膠加完并在柱內(nèi)沉降不再變動為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據(jù)加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。
（3）勻漿法： 攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢琛Ｈ绻疵搫┦鞘兔?em>/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。
上樣
將欲分離的樣品溶于少量裝柱時用的洗脫劑中，制成體積小、濃度高的樣品溶液，加入層析柱中硅膠面上。如樣品不溶于裝柱時用的洗脫劑，則將樣品溶于易揮發(fā)的溶劑中，并加入適量硅膠（不超過柱中硅膠全量的1/10）與其拌勻，除盡溶劑，將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂（始終保持洗脫劑有一定的液面），再覆蓋一層硅膠即可。
上樣時注意沿著柱內(nèi)壁慢慢加入，始終保持硅膠上端表面平整；上樣量為硅膠的1/60~1/30。
洗脫
洗脫劑的選用可通過薄層色譜篩選，一般TLC展開時Rf 值為0.2~0.3的溶劑系統(tǒng)是最佳的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫法洗脫。
先打開柱下端活塞，保持洗脫劑流速1~2滴/秒。上端不斷添加洗脫劑（可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近）。如單一溶劑洗脫效果不好，可用混合溶劑洗（一般不超過三種溶劑），通常采用梯度洗脫。洗脫劑的洗脫能力由弱到強(qiáng)逐步遞增。
收集處理
等份收集洗脫液，每份收集量大概與所用硅膠的量相當(dāng)。每份洗脫液采用薄層定性檢查，合并含相同成分的洗脫液。經(jīng)濃縮、重結(jié)晶處理往往可得到某一單體成分。如仍為幾個單體成分的混合物，不易析出單體成分的結(jié)晶。則需要進(jìn)一步層析或用其他方法分離。

注：
(1)柱色譜分離能力比薄層分離能力強(qiáng)，效果更好，尤其對結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)接近、采用薄層難以分離的成分分離效果好。
(2) 洗柱子能不用含水的混合溶劑，就盡量不要用。