玉米支鏈淀粉測(cè)定 簡(jiǎn)易方法
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玉米支鏈淀粉測(cè)定 簡(jiǎn)易方法【專(zhuān)家解說(shuō)】:中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉測(cè)定法》 適用范圍
1.本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉含量的測(cè)定。 2 參考
【專(zhuān)家解說(shuō)】:中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉測(cè)定法》 適用范圍
1.本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉含量的測(cè)定。
2 參考標(biāo)準(zhǔn)
GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉測(cè)定法》
GB3523—83《谷類(lèi)、油料作物種子水分測(cè)定法》
3 測(cè)定原理
淀粉與碘形成碘—淀粉復(fù)合物,并具有特殊的顏色反應(yīng)。支鏈淀粉與碘生成棕紅色
復(fù)合物,直鏈淀粉與碘生成深藍(lán)色復(fù)合物。在淀粉總量不變條件下,將這兩種淀粉分散
液按不同比例混合,在一定的波長(zhǎng)和酸度條件下與碘作用,生成由紫紅到深藍(lán)一系列顏
色,代表其不同直鏈淀粉與支鏈淀粉含量比例,根據(jù)吸光度與直鏈淀粉濃度呈線性關(guān)
系,可用分光光度計(jì)測(cè)定。
4 儀器、設(shè)備
4.1 粉碎機(jī)(實(shí)驗(yàn)室用旋風(fēng)磨)。
4.2 分光光度計(jì):721型或具有相同性能的其他型號(hào)。
4.3 分析天平:感量 0.0001g。
4.4 玻璃儀器:50ml具塞刻度試管,100ml容量瓶。
5 試劑配制
除注明者外均為分析純,水為蒸餾水。
5.1 氫氧化鈉(GB629—81),lmol.L-1、0.09mol,L-1水溶液,準(zhǔn)確標(biāo)定。
5.2 冰乙酸(GB676—78),1mol L-1水溶液,準(zhǔn)確標(biāo)定。
5.3 碘貯備溶液及碘試劑:稱(chēng) 2g碘和 20g碘化鉀(GB1272—77)用蒸餾水溶解并稀釋
至 100ml,即為碘貯備液。取 10ml碘貯備液稀釋至 100ml,即為碘試劑。
5.4 馬鈴薯直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液:1mg/ml,取烘干(55-56℃ 真空干燥)的馬鈴薯直鏈
淀粉純品,稱(chēng)取重量相當(dāng)于含 0.1000g淀粉,放入 100ml容量瓶中,加入 1ml無(wú)水乙醇
濕潤(rùn)樣品,再加 9mlmol·L-1氫氧化鈉溶液,于沸水浴分散 10min,迅速冷卻后,用水定
容。
5.5 支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液:1mg/ml,選擇與待測(cè)谷物樣品相應(yīng)的蠟質(zhì)谷物標(biāo)準(zhǔn)品,稱(chēng)取
重量相當(dāng)于含 0.1000g粗淀粉,放入 100ml容量瓶中,加 1ml無(wú)水乙醇,再加 9ml1mol·
L-1氫氧化鈉溶液,于沸水浴加熱 10min,迅速冷卻后,用水定容。
5.6 石油醚(HG3—1003—76),沸程 60-90 。
6 樣品的選取和制備
6.1 將樣品挑選干凈(谷子脫殼、稻谷制成精米),按四分法取樣 20g。
6.2 用粉碎機(jī)將樣品粉碎,全部通過(guò) 0 177mm孔徑篩(80號(hào)),混勻裝入磨口瓶備用。
7 測(cè)定步驟
7.1 混合校準(zhǔn)曲線繪制
取 6個(gè) 100ml容量瓶,分別加入 1mg/ml馬鈴薯直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、0.25、0.50、
1.00、1.50、2.00ml,再依次加入1mg/ml支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液 5、4.75、4.50、4.00、
3.50、3.00ml,總量為 5ml。另取 1個(gè) 100ml容量瓶,加入 0.09mo1.L-1氫氧化鈉溶液
5ml作空白。然后于各瓶中依次加入約 50ml水、1ml1mol·L-1乙酸及 1ml碘試劑。用水
定容后顯色 10min,在 620nm處讀取吸光度。
以直鏈淀粉毫克數(shù)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制校準(zhǔn)曲線或建立回歸方程。
7.2 樣品測(cè)定
7.2.1 按 GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉測(cè)定法》和 GB3523—83《谷類(lèi)、油料作物種
子水分測(cè)定法》測(cè)定樣品的粗淀粉含量和水分。
7.2.2 樣品分散:稱(chēng)取相當(dāng)于 0.1000g粗淀粉的樣品(如按樣品干重計(jì)算直鏈淀粉百分
含量時(shí),稱(chēng)取樣品 100mg)于 100ml容量瓶中,加 1ml無(wú)水乙醇,充分濕潤(rùn)樣品,再加
入 9ml1mol.L-1氫氧化鈉溶液,于沸水浴中分散 10min,迅速冷卻,用水定容。
7.2.3 脫脂:取 20ml分散液于 50ml具塞刻度試管中,加入 7-10ml石油醚,間歇搖動(dòng)
10min,靜止 15min,分層后用連接在水泵上的吸管抽吸,吸去上部石油醚層。重復(fù)以上
操作 2-5次(精米脫脂二次,玉米、谷子須脫脂三次)。
7.2.4 測(cè)定:吸取脫脂后的堿分散液 5.00ml于 100ml容量瓶中,加水 50ml,再加入
lmol L-1乙酸溶液 1ml及碘試劑 1ml,用水定容。顯色 10min后,在 620nm處讀取吸光
度。
注:測(cè)定樣品與繪制校準(zhǔn)曲線時(shí)的溫度相差不能超過(guò) 1 。
8 結(jié)果計(jì)算
8.1 計(jì)算公式
a.直鏈淀粉(%,占淀粉總量)按式(1)計(jì)算:
G×100
直鏈淀粉(%,占淀粉總量) =-------×100…………………………………(1)
m1×5
b.直鏈淀粉(%,占樣品干重)按式(2)計(jì)算:
G×100
直鏈淀粉(%,占樣品干重) = -----------------×100………………………(2)
m2× 5× (1-H)
式中: G——從相應(yīng)的混合校準(zhǔn)曲線或回歸方程求出的直鏈淀粉質(zhì)量,mg;
m1——稱(chēng)取樣品中所含粗淀粉的質(zhì)量,100mg;
m2——稱(chēng)取樣品的質(zhì)量,100mg;
H——水分百分率。
8.2 結(jié)果表示
兩個(gè)平行測(cè)定的結(jié)果,用算術(shù)平均值表示。保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。第三位數(shù)的舍入見(jiàn)
GB1.1—81《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)的一般規(guī)定》附錄 C。
8.3 結(jié)果的允許誤差
兩個(gè)平行測(cè)定值的相對(duì)誤差,不得超過(guò) 2%。
附 錄 A
馬鈴薯直鏈淀粉純品制備方法
(參考件)
A.1 儀器、設(shè)備
A.1.1 離心機(jī)(4000r/min)。
A.1.2 電動(dòng)攪拌器。
A.1.3 冰箱。
A.1.4 真空干燥箱。
A.1.5 磁力攪拌器。
A.1.6 232型甘汞電極或具有相同性能的其他型號(hào)。
A.1.7 213型鉑電極或具有相同性能的其他型號(hào)。
A.1.8 0-1.000V毫伏表。
A.2 試劑
除注明者外,均為分析純,水為蒸餾水。
A.2.1 氫氧化鈉(GB629—81),0.5mol·L-1水溶液。
A.2.2 鹽酸(GB622—77),1mol.L-1、1.5mol.L-1、2mol.L-1水溶液。
A.2.3 正丁醇(HG3—1012—76)。
A.2.4 異戊醇(HG3—996—76)。
A.2.5 碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱(chēng)取 0.1784g碘酸鉀(GB651—77,優(yōu)級(jí)純)用水溶解后,轉(zhuǎn)
入 1000ml容量瓶中用水定容,即 8.34×10-4mo1.L-1。
A.2.6 碘化鉀溶液:稱(chēng)取66.40g碘化鉀(GB1272—77)用水稀釋至1000ml,即0.4moL-1。
A.3 制備方法
稱(chēng)取馬鈴薯淀粉 10g,加少量無(wú)水乙醇使樣品濕潤(rùn),再加入 350m10.5mol.L-1氫氧化
鈉,放入沸水浴加熱攪拌 20min至完全分散,冷卻,以 4000r/min離心 20min,取上清液
用 1.5moI·L-1鹽酸調(diào)至 pH6.5(用 pH精密試紙),然后加入 1.1( V/V)丁醇 -異戊醇
80ml,在沸水浴中加熱攪拌 10min,冷卻至室溫。移入冰箱內(nèi)(2-4 )靜置 24h去掉上層
污物層,以 4000r/min離心 15min,棄掉上清液,沉淀物即為粗直鏈淀粉。
用飽和正丁醇水溶液洗滌沉淀物(粗直鏈淀粉),4000r/min離心 15min,將沉淀物
轉(zhuǎn)入 200ml飽和正丁醇水溶液中,在沸水浴中加熱溶解(10-15min),冷卻至室溫,放
入冰箱內(nèi)(2-4 )24h,棄去上層污物層,以 4000r/min離心 15min,沉淀物再加 200ml
飽和正丁醇水溶液加熱溶解,反復(fù)純化三次。最后沉淀物用無(wú)水乙醇反復(fù)洗滌離心 3-
4次,在真空干燥箱中(55-56 )干燥。即得直鏈淀粉純品。
A.4 純品質(zhì)量鑒定
A.4.1 淀粉含量測(cè)定
稱(chēng) 0.1000g純品加入 10m10.5mol·L-1氫氧化鈉在沸水浴中加熱分散,再加入21.5ml2mol
·L-1鹽酸,在沸水浴回流水解 2h,用費(fèi)林氏液法(GB5513—85《糧食、油料檢驗(yàn) 還
原糖和非還原糖測(cè)定法》)測(cè)定還原糖,乘以 0.9即得淀粉量,計(jì)算純品含量。
A.4.2 碘 -淀粉復(fù)合物吸收光譜測(cè)定
取5.4溶液 2ml(1mg/ml直鏈淀粉)及 0.09mol·L-1氫氧化鈉溶液 3ml加 50ml水稀
釋后,再加入 1mol·L-1乙酸溶液 1ml和碘試劑 1ml,用水定容至 100ml,顯色 10min,于
分光光度計(jì)測(cè)定 500-800nm的吸收譜。
A.4.3 碘結(jié)合量測(cè)定
A.4.3.1 測(cè)定
稱(chēng)取重量相當(dāng)于含 0.1000g淀粉的烘干馬鈴薯直鏈淀粉純品于 100ml容量瓶中,加幾滴
無(wú)水乙醇濕潤(rùn)后再加入 0.5mol·L-1氫氧化鈉溶液 10ml,置沸水浴完全分散,冷卻、加水定
容。吸 5ml(含直鏈淀粉 5mg)分散液放入 200ml燒杯中,加入 85ml水,5ml1mol·L-1鹽酸
及5ml0.4mol·L-1碘化鉀溶液,按電位滴定裝置要求,把燒杯置于電磁攪拌器上,將鉑電極
及甘汞電極插入液面下,在電磁攪拌下,用 5mi微量滴定管滴加碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液,每次滴加
0.2ml(或 0.1ml),加后 1min讀取毫伏數(shù),滴定終點(diǎn)用二次微商法計(jì)算。
A 4.3.2 計(jì)算
0.6346
直鏈淀粉碘結(jié)合量,% =-------×T×100
m
式中:m——直鏈淀粉質(zhì)量,mg;
T——8.34×10-4mol·L-1碘酸鉀溶液滴定體積,ml;
0.6346——每毫升 8.34×10-4mol.L-1碘酸鉀溶液相當(dāng)于碘的質(zhì)量,0.6346mg。
A.4.4 馬鈴薯直鏈淀粉純品標(biāo)準(zhǔn)
馬鈴薯直鏈淀粉純品必須具備:a.λmax為 640-650nm;b 淀粉含量在 85%以上;c 碘結(jié)
合量在 19.5以上;d.A0.002%,λmax在 20℃時(shí)為340以上。
1cm
附 錄 B
水稻、玉米、谷子支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品的選擇與制備
(參考件)
B.1 碘 -淀粉復(fù)合物吸收光譜測(cè)定
取 5.5溶液 5ml(1mg/mL支鏈淀粉),加 50ml水稀釋后,再加入 1mol·L-1乙酸溶液
1ml和碘試劑 1ml,加水至 100ml,顯色 10min,用分光光度計(jì)測(cè)定 400-640nm的吸收譜。
B.2 標(biāo)準(zhǔn)品的選擇
水稻、玉米、谷子支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品可以從相應(yīng)的蠟質(zhì)谷物品種中選擇,標(biāo)準(zhǔn)品必須
分別具備:
水稻:λmax520-530nm,A0.005%, 620nm,在20℃時(shí)為17以下;
1cm
玉米:λmax520-530nm,A0.005%, 620nm,在20℃時(shí)為25以下;
1cm
谷子:λmax530-540nm,A0.005%, 620nm,在 20℃時(shí)為22以下。
1cm
B.3 標(biāo)準(zhǔn)品制備
取適量(10-20g)通過(guò) 0.177-0.149mm孔徑篩(80-100號(hào))的蠟質(zhì)谷粉,分別
用甲醇及石油醚在索式脂肪抽提器回流脫脂 16h,放入真空干燥箱烘干(55-56℃)備
用,同時(shí)按 GB5006—85測(cè)定淀粉含量。朋友。這是2007年的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)??梢詤⒖家幌?/div>
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