如何鑒別五味子的優(yōu)劣

【專家解說】： 2.鑒別方法   2．1性狀鑒別五味子呈不規(guī)則的球形或扁球形,直徑5～8mm表面紅色紫紅色或暗紅色,皺縮,凹凸不平,顯油潤(rùn):有的表面呈黑紅色或出現(xiàn)“白霜”。果肉柔軟,種子1～2枚,腎形,長(zhǎng)4～5mm,表面棕黃色,平滑有光澤;種皮薄而脆,種臍在一側(cè),顯著凹入,顏色較深;除去種皮可見淡黃色胚乳,角質(zhì)狀,油性,胚小,位于一端。種子破碎后,有香氣,味酸而辛烈,微苦。南五味子呈球形或扁球形,直徑4～6mm,表面棕紅色至暗棕色,干癟,皺縮。果肉常緊貼在種子上,有時(shí)微有白色粉霜。內(nèi)含種子1～2枚,腎狀球形,直徑3～4 mm,表面黃棕色,微粗糙,有光澤,種皮薄而脆;種臍在一側(cè),稍凹入,脊部粗糙,具有疣狀突起;胚乳富含油性,胚小,位于一端。果肉氣微,昧微酸。兩者的主要鑒別要點(diǎn)是:五味子表面顯紅色、紫紅色,皺縮,油潤(rùn),果肉柔軟;南五味子,表面棕紅色至暗棕色,皺縮干癟,果肉緊貼種子上。   2．2顯微鑒別  五味子粉末呈暗紫色,種皮表皮石細(xì)胞表面觀呈多角形或長(zhǎng)多角形,壁厚,孔溝極細(xì)密,細(xì)胞腔內(nèi)含深棕色物;種皮內(nèi)層石細(xì)胞呈多角形,類圓形或不規(guī)則,壁稍厚,紋孔較大。果皮表皮細(xì)胞表面觀類多角形,垂周壁呈連珠狀增厚,表面有角質(zhì)線紋,表皮中散有油細(xì)胞;中果皮細(xì)胞皺縮,內(nèi)含深棕色物及淀粉粒,淀粉粒類圓形或多角形,單粒圓球型,復(fù)粒由2-6個(gè)分粒組成,可見臍點(diǎn)。南五味子粉末呈暗棕色。種皮表皮石細(xì)胞表面觀呈多角形或長(zhǎng)多角形,壁厚,孔溝極密,細(xì)胞腔內(nèi)含棕色物;種皮表皮石細(xì)胞縱斷面呈長(zhǎng)方形,外側(cè)壁無突起,較內(nèi)壁厚,壁孔及孔溝細(xì)小或不明顯。種皮內(nèi)層石細(xì)胞呈長(zhǎng)圓形或類圓形,壁厚,壁孔及孔溝明顯。果皮表皮細(xì)胞表面觀類多角形,垂周壁不呈連珠狀增厚。淀粉粒單粒呈不規(guī)則的圓形,復(fù)粒由2-4個(gè)分粒組成。兩者的主要鑒別要點(diǎn)是:五味子果皮表皮細(xì)胞類多角形,垂周壁略呈連珠狀增厚,而南五味子果皮表皮細(xì)胞表面觀類多角形,垂周壁不呈連珠狀增厚。       2．3色譜鑒別       2．3．1薄層色譜法(TLC)  薄層色譜法是中藥鑒別中專屬性較強(qiáng)的一種方法,應(yīng)用較普遍。韓正洲等采用高效硅膠GF254板,以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯-甲酸(15:5:1)上層溶液加石油醚(60～90℃)為展開劑展開,以五味子甲素、乙素為對(duì)照品,在紫外燈254nm下觀察熒光淬滅點(diǎn),結(jié)果南五味子薄層圖譜中無五味子乙素斑點(diǎn)。       2．3．2高效液相法(HPLC) 冷文金等以五味子對(duì)照藥材為對(duì)照品，采用AllitimaC18(4.6mm×250mm)柱,以甲醇-水(13:7)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm,以保留時(shí)間為鑒別參數(shù),結(jié)果五味子對(duì)照藥材共9個(gè)峰,樣品五味子共8個(gè)峰,與對(duì)照藥材相比少1個(gè)峰,其它峰保留時(shí)間都與對(duì)照藥材一致; www.xiangshui88.com 南五味子共6個(gè)峰,且只有1個(gè)峰與對(duì)照藥材一致,由此可以鑒別兩者。陳洪軒等建立了五味子指紋圖譜,色譜柱:ODS柱(4.6mm×250mm),檢測(cè)波長(zhǎng):254nm,柱溫:30℃,流速:1 mL·min-1,流動(dòng)相:甲醇-水梯度洗脫,分別以五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲作為對(duì)照品檢測(cè),結(jié)果南五味子圖譜與北五味子的HPLC指紋圖譜有較大差別,以五味子甲素為參照,有3個(gè)共有峰。       2．4光譜法鑒別       2．4．1紫外分光光度法  鄧君麗等取南、北五味子水提取液,在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,結(jié)果南五味子在282nm處有最大吸收,在274nm處有最小吸收;北五味子在283nm處有最大吸收,在248nm處有最小吸收,以此作為鑒別依據(jù)。程秀民等取南、北五味子,分別用極性溶劑和非極性溶劑提取,測(cè)定其紫外零階、二階導(dǎo)數(shù)光譜,結(jié)果極性溶劑提取物光譜有鑒別意義。北五味子在272±6nm出現(xiàn)一個(gè)大寬峰,南五味子在272nm處只出現(xiàn)兩個(gè)小肩峰;對(duì)二階導(dǎo)數(shù)光譜進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)兩者的光譜形狀及光譜數(shù)據(jù)均有明顯差異。       2．4．2熒光光譜法程秀民等對(duì)南、北五味子的極性溶劑和非極性溶劑提取物,分別測(cè)定熒光光譜,結(jié)果北五味子和南五味子的極性溶劑提取物光譜,北五味子激發(fā)光譜出現(xiàn)三個(gè)峰和三個(gè)小肩峰,最大激發(fā)波長(zhǎng)為257nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為352nm;南五味子激發(fā)光譜出現(xiàn)一個(gè)峰和三個(gè)肩峰,最大激發(fā)波長(zhǎng)為210nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為347nm。二者的激發(fā)光譜有較大差異,有鑒別意義。發(fā)射光譜差異較小,不具備鑒別意義。非極性溶劑提取物光譜,北五味子激發(fā)光譜出現(xiàn)一個(gè)峰和一個(gè)小肩峰,最大激發(fā)波長(zhǎng)為341nm;南五味子激發(fā)光譜出現(xiàn)兩個(gè)峰,最大發(fā)射波長(zhǎng)為319nm,區(qū)別較明顯。       2．4．3紅外光譜法 田進(jìn)國(guó)等取藥材分別用石油醚、乙醚和水提取,提取物經(jīng)溴化鉀壓片，掃描測(cè)定紅外光譜。結(jié)果北五味子的光譜與對(duì)照藥材在峰的數(shù)目、峰位和www.flm8.com 峰形都能吻合,僅某些峰的相對(duì)強(qiáng)弱有差異。南五味子的光譜輪廊與北五味子的非常相似,這說明其成分大體相似,但是除了某些峰的相對(duì)強(qiáng)度有變化外,還出現(xiàn)了幾個(gè)新的吸收峰。這些光譜特征可以作為區(qū)別南、北五味子的依據(jù)。       2．5生物鑒別       2．5．1簡(jiǎn)單重復(fù)順序列間多態(tài)性(Inter-simple Se-quence Repeat,ISSR)技術(shù)ISSR技術(shù)是根據(jù)真核生物基因組中廣泛存在著以1～6個(gè)堿基的短核苷酸序列為基本單位的重復(fù)序列的現(xiàn)象,以PCR為基礎(chǔ),采用20個(gè)堿基左右的重復(fù)錨定引物擴(kuò)增基因組中這些重復(fù)序列之間的片段，具有穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于中藥品種鑒定。孫岳等采用CTAB法,從去除果肉果皮的五味子果實(shí)中提取總DNA,并用ISSR技術(shù)對(duì)南、北五味子基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果9個(gè)ISSR引物中有3個(gè)擴(kuò)增出多態(tài)性好的條帶,根據(jù)其瓊脂糖凝膠電泳上顯示的DNA帶型差異可迅速區(qū)分南、北五味子。       2．5．2隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA(Random Amplified Poly-morphic DNA，RAPD)技術(shù)RAPD技術(shù),是一種用于檢測(cè)基因組DNA多態(tài)性和基因組遺傳標(biāo)記的方法。王培訓(xùn)等采用改良高鹽低pH法提取DNA,并用隨機(jī)擴(kuò)增引物DNA法,篩選適于鑒別南、北五味子的隨機(jī)引物,結(jié)果得到一條引物S429能準(zhǔn)確區(qū)分南、北五味子,可利用隨機(jī)引物S429通過RAPD準(zhǔn)確區(qū)分南、北五味子。