蛋黃中提取膽固醇的方法

【專家解說】：膽固醇的 1 主題內(nèi)容與適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用分光光度計(jì)測定各類動物性食品中膽固醇的方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類動物性食品中膽固醇的測定。 2 原理 當(dāng)固醇類化合物與酸作用時，可脫水并發(fā)生聚合反應(yīng)，產(chǎn)生顏色物質(zhì)。 因此可先 對食品樣品進(jìn)行提取和皂化，用硫酸鐵銨試劑作為顯色劑，測定食品膽固醇的含量。 3 試劑 全部試劑除注明外均為分析純，試驗(yàn)用水為蒸餾水。 3.1 石油醚。 3.2 無水乙醇。 3.3 濃硫酸。 3.4 冰乙酸：優(yōu)級純。 3.5 磷酸。 3.6 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 3.7 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液。 3.7.1 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）：精確稱取膽固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定 容至100mL。此液至少在2個月內(nèi)保持穩(wěn)定。 3.7.2 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)常備液（100(g/mL）：吸取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液10mL，用冰乙酸定 容至100mL。此液用時臨時配制。 3.8 鐵釩顯色劑。 3.8.1鐵釩儲備液：溶液4.463g硫酸鐵銨〔FeNH4(SO4)2•H2O〕于100mL85％磷酸中， 貯于干燥器內(nèi)，此液在室溫中穩(wěn)定。 3.8.2 鐵釩顯色液：吸取鐵釩儲備液10mL，用濃硫酸定容至100mL。貯于干燥器內(nèi)， 以防吸水。 3.9 50％氫氧化鉀溶液：稱取50g氫氧化鉀，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。 3.10 5％氯化鈉溶液：稱取5g氯化鈉，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。 3.11 鋼瓶氮?dú)猓杭兌?9.99％。 4 儀器和設(shè)備 4.1 實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。 4.2 721型分光光度計(jì)。 4.3 電熱恒溫水浴。 4.4 電動振蕩器。 4.5 具玻塞試管：體積100ml、25mL。 5 操作步驟 5.1 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)線 吸取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)常備液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分別置于10mL試管內(nèi)，在各 管內(nèi)加入冰乙酸使總體積皆達(dá)4mL。沿管壁加入2mL鐵釩顯色液，混勻，在15～90min 內(nèi)，在560～575nm波長下比色。以膽固醇標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)， 吸光度之為縱坐標(biāo)做 標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5.2 樣品測定 5.2.1 食品脂肪的提取與測定 根據(jù)食品種類分別用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和羅高氏法提取脂肪。 并計(jì) 算出每100g食品中的脂肪含量。 5.2.2 食品膽固醇的測定 將提取的油脂3～4滴（約含膽固醇300～500mg ），置于25mL試管內(nèi)，準(zhǔn)確記錄其重量。加入4mL無水乙醇，0.5mL50%氫氧化鉀溶液，在65℃恒溫水浴中皂化1h。皂化時每隔20～30min振蕩一次使皂化完全。皂化完畢，取出試管，冷卻。加入3mL5％氯化鈉溶液，10mL石油醚，蓋緊玻塞，在電動振蕩器上振搖2min， 靜置分層（一般 約需1h以上）。 取上層石油醚液2mL，置于10mL具玻塞試管內(nèi)，在65℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑尤?4mL冰乙酸，2mL鐵釩顯色液，混勻，放置15min后在560～575nm波長下比色，測得吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的膽固醇含量。 6 結(jié)果計(jì)算 m×V×c 1 X＝———————— ×———— V1×m1 1000 式中： X—樣品中膽固醇含量，mg/100g； m—測得的吸光度值在膽固醇標(biāo)準(zhǔn)線上顯示的膽固醇含量，mg ； V—石油醚總體積，mL； v1—取出的石油醚體積，mL； m1—稱取食品油脂樣品量，g； c—食品樣品油脂含量，g/100g； 1/1000—折算成每100g食品中膽固醇毫克數(shù)。 7 平均允許誤差 同一實(shí)驗(yàn)室同時或連續(xù)兩次測定結(jié)果之差不得超過平均值的10％。 8 標(biāo)準(zhǔn)曲線 0.60├ │ 0.50├ │ 0.40├ │ 0.30├ │ 0. 20├ │ 0.10├ │ 0. 00└————┴————┴————┴————┘ 0 50 100 150 200mg 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線 ———————————┬——————┬——————┬—————— 測定時間 │ │ │ 膽固醇，mg │ 1985 │ 1990 │ 1991 ———————————┼——————┼——————┼—————— 50 │ 0.132 │ 0.130 │ 0.130 100 │ 0.255 │ 0.260 │ 0.255 150 │ 0.390 │ 0.390 │ 0.390 200 │ 0.515 │ 0.510 │ 0.513 ———————————┴——————┴——————┴—————— 注：表中每個值均為三個測定值的平均值。