提煉膽固醇

膽固醇的
1  主題內(nèi)容與適用范圍
    本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用分光光度計測定各類動物性食品中膽固醇的方法。
    本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類動物性食品中膽固醇的測定。
2  原理
    當(dāng)固醇類化合物與酸作用時，可脫水并發(fā)生聚合反應(yīng)，產(chǎn)生顏色物質(zhì)。 因此可先
對食品樣品進(jìn)行提取和皂化，用硫酸鐵銨試劑作為顯色劑，測定食品膽固醇的含量。
3  試劑
    全部試劑除注明外均為分析純，試驗用水為蒸餾水。
3.1  石油醚。
3.2  無水乙醇。
3.3  濃硫酸。
3.4  冰乙酸：優(yōu)級純。
3.5  磷酸。
3.6  膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
3.7  膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液。
3.7.1 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）：精確稱取膽固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定
容至100mL。此液至少在2個月內(nèi)保持穩(wěn)定。
3.7.2  膽固醇標(biāo)準(zhǔn)常備液（100(g/mL）：吸取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液10mL，用冰乙酸定
容至100mL。此液用時臨時配制。
3.8 鐵釩顯色劑。
3.8.1鐵釩儲備液：溶液4.463g硫酸鐵銨〔FeNH4(SO4)2?H2O〕于100mL85％磷酸中，
貯于干燥器內(nèi)，此液在室溫中穩(wěn)定。
3.8.2  鐵釩顯色液：吸取鐵釩儲備液10mL，用濃硫酸定容至100mL。貯于干燥器內(nèi)，
以防吸水。
3.9  50％氫氧化鉀溶液：稱取50g氫氧化鉀，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
3.10   5％氯化鈉溶液：稱取5g氯化鈉，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
3.11  鋼瓶氮氣：純度99.99％。
4  儀器和設(shè)備
4.1  實驗室常用設(shè)備。
4.2  721型分光光度計。
4.3  電熱恒溫水浴。
4.4  電動振蕩器。
4.5  具玻塞試管：體積100ml、25mL。  
5  操作步驟
5.1  膽固醇標(biāo)準(zhǔn)線
    吸取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)常備液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分別置于10mL試管內(nèi)，在各
管內(nèi)加入冰乙酸使總體積皆達(dá)4mL。沿管壁加入2mL鐵釩顯色液，混勻，在15～90min
內(nèi)，在560～575nm波長下比色。以膽固醇標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)， 吸光度之為縱坐標(biāo)做
標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.2  樣品測定
5.2.1  食品脂肪的提取與測定
    根據(jù)食品種類分別用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和羅高氏法提取脂肪。 并計
算出每100g食品中的脂肪含量。
5.2.2  食品膽固醇的測定
    將提取的油脂3～4滴（約含膽固醇300～500mg ），置于25mL試管內(nèi)，準(zhǔn)確記錄其重量。加入4mL無水乙醇，0.5mL50%氫氧化鉀溶液，在65℃恒溫水浴中皂化1h。皂化時每隔20～30min振蕩一次使皂化完全。皂化完畢，取出試管，冷卻。加入3mL5％氯化鈉溶液，10mL石油醚，蓋緊玻塞，在電動振蕩器上振搖2min， 靜置分層（一般
約需1h以上）。
    取上層石油醚液2mL，置于10mL具玻塞試管內(nèi)，在65℃水浴中用氮氣吹干，加入
4mL冰乙酸，2mL鐵釩顯色液，混勻，放置15min后在560～575nm波長下比色，測得吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的膽固醇含量。
6  結(jié)果計算
              m×V×c             1 
         X＝———————— ×————
              V1×m1             1000    
式中： X—樣品中膽固醇含量，mg/100g；
          m—測得的吸光度值在膽固醇標(biāo)準(zhǔn)線上顯示的膽固醇含量，mg ；
           V—石油醚總體積，mL；
         v1—取出的石油醚體積，mL；
        m1—稱取食品油脂樣品量，g；
           c—食品樣品油脂含量，g/100g；
  1/1000—折算成每100g食品中膽固醇毫克數(shù)。
7  平均允許誤差
    同一實驗室同時或連續(xù)兩次測定結(jié)果之差不得超過平均值的10％。
8  標(biāo)準(zhǔn)曲線
               0.60├
                   │
               0.50├  
                   │
               0.40├
                   │
               0.30├
                   │
              0. 20├
                   │
               0.10├                                      
                   │                                      
              0. 00└————┴————┴————┴————┘
                    0        50       100       150       200mg
                                 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線
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     測定時間         │            │            │
膽固醇，mg           │   1985     │    1990    │   1991
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    50                │   0.132    │     0.130   │   0.130
    100               │   0.255    │     0.260   │   0.255
    150               │   0.390    │     0.390   │   0.390
    200               │   0.515    │     0.510   │   0.513
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  注：表中每個值均為三個測定值的平均值。