苯甲酸的檢測方法是什么?

【專家解說】：【GB/T 5009.29—1996】 食品中山梨酸、苯甲酸的測定方法 1 主題內(nèi)容與適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測定。 最低檢出濃度：氣相色譜法最低檢出量為1μg，用于色譜分析的樣品為1g時，最低檢出濃度為1mg/kg。 第一篇 氣相色譜法(第一法) 2 原理 樣品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測定，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。 3 試劑 3.1 乙醚：不含過氧化物。 3.2 石油醚：沸程30～60℃。 3.3 鹽酸。 3.4 無水硫酸鈉。 3.5 鹽酸(1＋1)：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。 3.6 氯化鈉酸性溶液(40g/L)：于氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1＋1)酸化。 3.7 山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚—乙醚(3＋1)混合溶劑溶解后并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg山梨酸或苯甲酸。 3.8 山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取適量的山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以石油醚－乙醚(3＋1)混合溶劑稀釋至每毫升相當(dāng)于50，100，150，200，250mg山梨酸或苯甲酸。 4 儀器 氣相色譜儀：具有氫火焰離子化檢測器。 5 分析步驟 5.1 樣品提取 稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸(1＋1)酸化，用15，10mL乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層乙醚提取液吸入另一個25mL帶塞量筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液(40g/L)洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。準(zhǔn)確吸取5mL乙醚提取液于5mL帶塞刻度試管中，置40℃水浴上揮干，加入2mL石油醚－乙醚(3＋1)混合溶劑溶解殘渣，備用。 5.2 色譜參考條件 5.2.1 色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長2m，內(nèi)裝涂以5%(m/m)DEGS＋1%(m/m)H3PO4固定液的60～80目Chromosorb W AW。 5.2.2 氣流速度：載氣為氮氣，50mL/min(氮氣和空氣、氫氣之比按各儀器型號不同選擇各自的最佳比例條件)。 5.2.3 溫度：進(jìn)樣口230℃；檢測器230℃；柱溫170℃。 5.3 測定 進(jìn)樣2μL標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中，可測得不同濃度山梨酸、苯甲酸的峰高，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰高值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 同時進(jìn)樣2μL樣品溶液。測得峰高與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。 5.4 計算 式中：X1——樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg； m1——測定用樣品液中山梨酸或苯甲酸的質(zhì)量，μg； V1——加入石油醚－乙醚(3＋1)混合溶劑的體積，mL； V2——測定時進(jìn)樣的體積，μL； m2——樣品的質(zhì)量，g； 5——測定時吸取乙醚提取液的體積，mL； 25——樣品乙醚提取液的總體積，mL。 由測得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。 結(jié)果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。 5.5 允許差 相對相差≤10%。 5.6 其他 在色譜圖中山梨酸保留時間為2分53秒；苯甲酸保留時間為6分8秒。 （圖略） 第二篇 高效液相色譜法(第二法) 6 原理 樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào)pH至近中性，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時間和峰面積進(jìn)行定性和定量。 7 試劑 方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純試劑，水為蒸餾水或同等純度水，溶液為水溶液。 7.1 甲醇：經(jīng)濾膜(0.5μm)過濾。 7.2 稀氨水(1＋1)：氨水加水等體積混合。 7.3 乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾。 7.4 碳酸氫鈉溶液(20g/L)：稱取2g碳酸氫鈉(優(yōu)級純)，加水至100mL，振搖溶解。 7.5 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量為1mg/mL，作為儲備溶液。 7.6 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量為1mg/mL，作為儲備溶液。 7.7 苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾(同時測定糖精鈉時可加GB/T 5009.28中3.4糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液)。 8 儀器 高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。 9 分析步驟 9.1 樣品處理 9.1.1 汽水：稱取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水(1＋1)調(diào)pH約7。加水定容至10～20mL，經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾。 9.1.2 果汁類：稱取5.00～10.0g樣品，用氨水(1＋1)調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，離心沉淀，上清液經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾。 9.1.3 配制酒類：稱取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1＋1)調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾。 9.2 高效液相色譜參考條件 9.2.1 色譜柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不銹鋼柱。 9.2.2 流動相：甲醇：乙酸銨溶液(0.02m0l/L)(5：95)。 9.2.3 流速：1mL/min。 9.2.4 進(jìn)樣量：10μL。 9.2.5 檢測器：紫外檢測器，波長230μm，靈敏度0.2AUFS。 根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。 9.3 計算 式中：X2——樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； m3——進(jìn)樣體積中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg； V4——進(jìn)樣體積，mL； V3——樣品稀釋液總體積，mL； m4——樣品質(zhì)量，g。 結(jié)果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。 9.4 允許差：相對相差≤10%。 9.5 其他 同GB/T 5009.28的5.6。 注：本方法可同時測定糖精鈉。 第三篇 薄層色譜法(第三法) 10 原理 樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。將樣品提取液濃縮，點于聚酰胺薄層板上，展開。顯色后，根據(jù)薄層板上苯甲酸、山梨酸的比移值，與標(biāo)準(zhǔn)比較定性，并可進(jìn)行概略定量。 11 試劑 11.1 異丙醇。 11.2 正丁醇。 11.3 石油醚：沸程為30～60℃。 11.4 乙醚：不含過氧化物。 11.5 氨水。 11.6 無水乙醇。 11.7 聚酰胺粉：200目。 11.8 鹽酸(1＋1)：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。 11.9 氯化鈉酸性溶液(40g/L)：于氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1＋1)酸化。 11.10 展開劑。 11.10.1 正丁醇＋氨水＋無水乙醇(7＋1＋2)。 11.10.2 異丙醇＋氨水＋無水乙醇(7＋1＋2)。 11.11 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg山梨酸。 11.12 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg苯甲酸。 11.13 顯色劑：溴甲酚紫－乙醇(50%)溶液(0.4g/L)，用氫氧化鈉溶液(4g/L)調(diào)至pH＝8。 12 儀器 12.1 吹風(fēng)機(jī)。 12.2 層析缸。 12.3 玻璃板：10cm×18cm。 12.4 微量注射器：10μL，100μL。 12.5 噴霧器。 13 操作方法 13.1 樣品提取 稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸(1＋1)酸化，用15，10mL乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層醚提取液吸入另一個25mL帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液(40g/L)洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。吸取10.0mL乙醚提取液分兩次置于10mL帶塞離心管中，在約40℃的水浴上揮干，加入0.10mL乙醇溶解殘渣，備用。 13.2 測定 13.2.1 聚酰胺粉板的制備：稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7mL水，研磨3～5min，立即倒入涂布器內(nèi)制成10cm×18cm、厚度0.3mm的薄層板兩塊，室溫干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。 13.2.2 點樣：在薄層板下端2cm的基線上，用微量注射器點1μL、2μL樣品液，同時各點1μL、2μL山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。 13.2.3 展開與顯色：將點樣后的薄層板放入預(yù)先盛有展開劑(11.10.1或11.10.2)的展開槽內(nèi)，展開槽周圍貼有濾紙，待溶劑前沿上展至10cm，取出揮干，噴顯色劑，斑點成黃色，背景為藍(lán)色。樣品中所含山梨酸、苯甲酸的量與標(biāo)準(zhǔn)斑點比較定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次為0.82，0.73)。 13.3 計算 式中：X3——樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； m5——測定用樣品液中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg； V5——加入乙醇的體積，mL； V6——測定時點樣的體積，mL； m6——樣品質(zhì)量，g； 10——測定時吸取乙醚提取液的體積，mL； 25——樣品乙醚提取液總體積，mL。 注：本方法還可以同時測定果醬、果汁中的糖精。 第四篇 禁用防腐劑定性試驗(第四法) 14 硼酸、硼砂 14.1 試劑 14.1.1 鹽酸(1＋1)：量取鹽酸100mL，加水稀釋至200mL。 14.1.2 碳酸鈉溶液(40g/L)。 14.1.3 氫氧化鈉溶液(4g/L)：稱取2g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至500mL。 14.1.4 姜黃試紙：稱取20g姜黃粉末，用冷水浸漬4次，每次各100mL，除去水溶性物質(zhì)后，殘渣在100℃干燥，加100mL乙醇，浸漬數(shù)日，過濾。取1cm×8cm濾紙條，浸入溶液中，取出，于空氣中干燥，貯于玻璃瓶中。 14.2 分析步驟 14.2.1 樣品處理 稱取3～5g固體樣品，加碳酸鈉溶液(40g/L)充分濕潤后，于小火上烘干、炭化后再置高溫爐中灰化。量取10～20mL液體樣品，加碳酸鈉溶液(40g/L)至呈堿性后，置水浴上蒸干、炭化后再置高溫爐中灰化。 14.2.2 定性試驗 14.2.2.1 姜黃試紙法：取一部分灰分，滴加少量水與鹽酸(1＋1)至微酸性，邊滴邊攪拌，使殘渣溶解，微溫后過濾。將姜黃試紙浸入濾液中，取出試紙置表面皿上，于60～70℃干燥，如有硼酸、硼砂存在時，試紙顯紅色或橙紅色，在其變色部分熏以氨即轉(zhuǎn)為綠黑色。 14.2.2.2 焰色反應(yīng) 取灰分置于坩堝中，加硫酸數(shù)滴及乙醇數(shù)滴，直接點火，硼酸或硼砂存在時，火焰呈綠色。 15 水楊酸 15.1 試劑 15.1.1 三氯化鐵溶液(10g/L)。 15.1.2 亞硝酸鉀溶液(100g/L)。 15.1.3 乙酸(50%)。 15.1.4 硫酸銅溶液(100g/L)。稱取10g硫酸銅(CuSO4?H2O)，加水溶解至100mL。 15.2 分析步驟 15.2.1 樣品提取 按GB/T 5009.28中9.1操作，將乙醚提取液蒸干后，殘渣備用。 15.2.2 定性試驗 15.2.2.1 三氯化鐵法：殘渣加1～2滴三氯化鐵溶液(10g/L)，水楊酸存在時顯紫堇色。 15.2.2.2 確證試驗：溶解殘渣于少量熱水中，冷后加4～5滴亞硝酸鉀溶液(100g/L)，4～5滴乙酸(50%)及1滴硫酸銅溶液(100g/L)，混勻，煮沸0.5h，放置片刻，水楊酸存在時呈血紅色(苯甲酸不顯色)。 附加說明： 本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。 本標(biāo)準(zhǔn)第一法由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)起草；第二法由天津食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所、遼寧省食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所、武漢市衛(wèi)生防疫站、浙江省衛(wèi)生防疫站、四川省衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草；第三、四法由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)解釋