油氣田土壤甲烷氧化菌實時熒光定量PCR檢測技術(shù)的建立與應用

【摘要】：【目的】建立快速檢測甲烷氧化菌含量的SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR技術(shù),用于油氣微生物勘探?！痉椒ā恳院屑淄檠趸δ芑騪moA片段的重組質(zhì)粒為標準品,優(yōu)化實驗條件,建立標準曲線,進行敏感性、重復性和特異性評價,并將該技術(shù)用于實際樣品的檢測。【結(jié)果】該技術(shù)標準曲線的相關系數(shù)R2為0.999 9,擴增效率為99.976%,檢測范圍為3.897×101-3.897×109 copies/μL,檢出限約為40 copies/μL,重復性實驗中CT值的變異系數(shù)優(yōu)于3%,對12種非甲烷氧化菌均沒有擴增,顯示該技術(shù)具有很好的敏感性、重復性和特異性。利用該技術(shù)對氣田、油田和非油氣田土樣進行了檢測,發(fā)現(xiàn)氣田具有明顯的異常高值。【結(jié)論】為油氣田的勘探建立了一種高效、特異、靈敏、準確的甲烷氧化菌熒光定量PCR檢測技術(shù),同時為其它指示菌檢測技術(shù)的建立提供了參考。 【作者單位】： 中國地質(zhì)科學院研究生院;中國地質(zhì)科學院水文地質(zhì)環(huán)境地質(zhì)研究所;河北省地下水污染機理與修復重點實驗室;
【關鍵詞】： 甲烷氧化菌 實時熒光定量PCR pmoA基因 油氣田土壤
【基金】：地質(zhì)調(diào)查項目(No.1212011120268) 中國地質(zhì)科學院水文地質(zhì)環(huán)境地質(zhì)研究所基本科研業(yè)務費項目(No.SK201214)
【分類號】：P618.13
【正文快照】： 在油氣藏壓力的驅(qū)動下,油氣藏的輕烴氣持續(xù)向地表作垂直擴散和運移,土壤中的專性微生物以輕烴氣作為唯一碳源在油氣藏正上方的地表土壤中非常發(fā)育,形成微生物異常,通過檢測微生物異?？梢灶A測下伏油氣藏的存在[1-2]。向上運移的輕烴氣中含量最多的是甲烷,甲烷氧化菌是以甲烷為

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