二氯甲烷降解菌的分離鑒定、降解特性及關(guān)鍵酶基因克隆與表達(dá)研究

【摘要】： 本文通過(guò)選擇性富集培養(yǎng),從長(zhǎng)期被鹵代脂肪烴污染的廢水和活性污泥中分離純化二氯甲烷高效降解菌,并對(duì)所分離菌株進(jìn)行生化鑒定以及16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育研究,進(jìn)一步開展了降解特性、關(guān)鍵酶基因克隆與表達(dá)方面的研究,以期為探索微生物對(duì)異型生物質(zhì)(Xenobiotics)的轉(zhuǎn)化與降解機(jī)理、典型有機(jī)污染物的生物處理、污染環(huán)境的生物修復(fù)提供創(chuàng)新的技術(shù)支持與方法論指導(dǎo)。 本研究獲得的主要結(jié)論如下: 1.從廢水和活性污泥中分離篩選得到2株二氯甲烷降解菌株,分別命名為WZ-12和wh22菌株。通過(guò)細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察、生理生化測(cè)試、抗生素抗性試驗(yàn)、碳源利用試驗(yàn)(Biolog)、全細(xì)胞脂肪酸分析、G+C mol%含量分析以及16S rDNA序列同源性分析,證明WZ-12和wh22菌株應(yīng)分別屬于芽孢桿菌屬及梭桿菌屬。其中WZ-12菌株被鑒定為環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)的又一菌株;推測(cè)菌株wh22應(yīng)當(dāng)是梭形桿菌(Lysinibacillus sphaericus)的又一菌株,首次發(fā)現(xiàn)了環(huán)狀芽孢桿菌菌株和梭形桿菌菌株具有二氯甲烷降解活性。 2.WZ-12和wh22兩株菌都有較寬的溫度、pH及二氯甲烷底物濃度適應(yīng)范圍。在菌體生長(zhǎng)最適的pH環(huán)境中,菌株對(duì)二氯甲烷的降解效率也最高;在30℃、初始pH6.0的MM培養(yǎng)基中,WZ-12菌株72 h對(duì)二氯甲烷的降解效率達(dá)85.23%。而wh22菌株在37℃、初始pH6.0的MM培養(yǎng)基中48 h的降解效率約80.09%。有機(jī)物的加入可使降解菌WZ-12對(duì)二氯甲烷的降解加速,其中酵母膏及葡萄糖效果優(yōu)于蛋白胨。有機(jī)物的加入對(duì)wh22菌株的降解能力影響不大;WZ-12和wh22菌株會(huì)因二氯甲烷濃度增加而產(chǎn)生抑制,降解率下降,符合非線性的高姆比茲模型。菌株WZ-12能適應(yīng)高鹽濃度生長(zhǎng),NaCl濃度在10-60 g L~(-1)范圍生長(zhǎng)良好,對(duì)CH_2Cl_2、CH_2BrCl、C_2H_2Cl_2和C_2H_4Cl_2均有降解能力,72 h降解效率分別為78.28%、58.19%、60.32%和45.08%。 3.菌株wh22含有1個(gè)降解性質(zhì)粒,分子量為48.8 kb,命名為pRC11。初步建立了質(zhì)粒pRC11的物理圖譜。該質(zhì)粒還是一個(gè)汞鹽抗性質(zhì)粒,可在不同種屬菌株之間轉(zhuǎn)移,以E.coli DH5(dcm~-)作為受體菌做質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn),陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子的轉(zhuǎn)化頻率為1.65×10~5/μg of plasmid DNA。 4.通過(guò)設(shè)計(jì)基于二次多項(xiàng)式數(shù)學(xué)模型,對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多元回歸分析,得到了如下適用于DCM降解率預(yù)測(cè)的經(jīng)驗(yàn)關(guān)聯(lián)式回歸模型: 采用響應(yīng)面分析法,在搖瓶水平上,得到了菌株WZ-12生物降解工藝的最優(yōu)條件為:DCM初始濃度380 mg/L(X_1)、葡萄糖添加濃度13.72 mg/L(X_2)、H_2O_2添加濃度115 mg/L(X_3)。在此條件下,預(yù)測(cè)得到的最大降解率為93.18%。對(duì)以上獲得的最佳工藝參數(shù)進(jìn)行搖床水平上的降解率試驗(yàn)驗(yàn)證,得到好氧降解率平均值為92.88±0.27%,與模型預(yù)測(cè)值(93.18%)吻合較好,該降解率回歸模型為菌株WZ-12在生物法處理含DCM廢氣的應(yīng)用有一定的指導(dǎo)意義。 5.對(duì)來(lái)自菌株WZ-12的脫鹵素酶進(jìn)行了分離純化和酶學(xué)性質(zhì)研究,獲得二氯甲烷脫鹵素酶,純酶分子量為31 kDa,比酶活提高了8.27倍,得率為34.83%,純化倍數(shù)為8.27。該酶為誘導(dǎo)酶,最佳產(chǎn)酶溫度為30℃,粗酶液在50℃以下具備一定的耐熱性能和穩(wěn)定性,最佳產(chǎn)酶pH為6.5;該酶在pH5-7之間穩(wěn)定較好,但當(dāng)pH大于7或小于5時(shí),穩(wěn)定性急劇下降。Ca~(2+)、Mg~(2+)對(duì)酶活有增強(qiáng)作用,而Cu~(2+)、Zn~(2+)和Ba~(2+)則抑制酶活性,Hg~(2+)對(duì)酶活性抑制影響最大。 該脫鹵素酶表觀Km值在30℃(pH7.0)為5.25×10~(-3)mol/L,Vmax為3.67×10~(-4)mol/L·min,K_(cat)為6.97×10~4S~(-1)。該酶的底物特異性不高,可以催化CH_2Cl_2、CH_2Br_2、CH_2I_2和CH_2BrCl脫鹵。 6.從菌株WZ-12中克隆得到二氯甲烷脫鹵素酶基因dcmR,并對(duì)克隆產(chǎn)物進(jìn)行了Southern雜交鑒定。dcmR編碼基因序列為864 bp,編碼脫鹵素酶蛋白大小為288個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)分子量32±1 kDa。BLAST比對(duì)結(jié)果顯示,克隆的基因片段與Methylobacterium sp.DM4的二氯甲烷脫鹵酶基因序列同源性達(dá)98.6%。蛋白的氨基末端約20-80 aa與GST有類似的結(jié)構(gòu)域,中間約第50位-80位aa間具有多個(gè)跟GSH的結(jié)合位點(diǎn)有關(guān)的超二級(jí)結(jié)構(gòu)模體結(jié)構(gòu)域。將所得到的菌株相關(guān)基因序列用SEQUIN軟件上傳至GenBank,得到序列登錄號(hào)FJ405230。 7.通過(guò)構(gòu)建具T7強(qiáng)啟動(dòng)子的pET高效表達(dá)載體(pET21a和pET15b),轉(zhuǎn)化E coli(DE3)RP,構(gòu)建了二氯甲烷脫鹵酶的原核表達(dá)系統(tǒng)。構(gòu)建了3種表達(dá)載體,pET-21a-dcmR(no-tag)不含任何標(biāo)簽,其轉(zhuǎn)化子的二氯甲烷脫鹵素酶酶活(21.95U·mL~(-1))高于原始菌株WZ-12(14.26U·mL~(-1)),可直接用于二氯甲烷生物降解的工程應(yīng)用研究;pET-21a- dcmR with his-tag引入了6個(gè)組氨酸殘基“標(biāo)簽”(His-tag),為后續(xù)酶蛋白分離純化獲得純化酶的研究非常有意義;pET-15b-dcmRwith his-tag and LVPRGS thrombin在引入6個(gè)組氨酸殘基“標(biāo)簽"(His-tag)的同時(shí),增加了凝血酶酶切位點(diǎn),方便了His-tag的切除。將3種原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化E.coli(DE3)RP并誘導(dǎo)表達(dá),得到了具有酶活性的融合蛋白。 8.探討重組酶的表達(dá)特點(diǎn)和部分酶學(xué)性質(zhì)。重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,細(xì)菌總蛋白表達(dá)量為0.76g/L,其中融合蛋白占總蛋白的32.00%,酶活最高達(dá)25.78U/mL,酶的比活為88.86 U/mg蛋白。重組菌周質(zhì)中酶活2.92 U/mL,胞內(nèi)酶活22.86 U/mL。重組菌產(chǎn)生的酶活力與比活較原降解菌株高1-2倍。利用融合蛋白N末端的His-tag,經(jīng)金屬螯合親和層析純化后,得到了純度較高的融合酶蛋白,酶蛋白的得率為72%,比活為144.73 U/mg。凝血酶切除His-tag后,經(jīng)SDS-PAGE測(cè)定,重組蛋白的分子量為33±1 kDa,與理論計(jì)算值34 kDa相符。重組的二氯甲烷脫鹵素酶在pH 6.5,溫度30℃有最大相對(duì)酶活。但重組的二氯甲烷脫鹵素酶對(duì)溫度和pH要敏感。最后,對(duì)重組菌的生長(zhǎng)特性和降解特性的研究表明,重組菌在LB培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特性與原始菌株沒(méi)有差別,生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期A_(600nm)值都可達(dá)到2.4左右。重組菌株dcmR-1在25 h的降解率達(dá)90%以上,降解效率比原降解菌株有明顯提高。 【關(guān)鍵詞】：二氯甲烷 生物降解 二氯甲烷脫鹵素酶 基因克隆與表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：Q93
【目錄】：

• 中文摘要9-12
• 英文摘要12-17
• 第一章 緒論17-58
• 1.1 二氯甲烷的分布和對(duì)環(huán)境的影響17-28
• 1.1.1 鹵代烴與二氯甲烷17-21
• 1.1.2 二氯甲烷在環(huán)境中的累積21-26
• 1.1.3 二氯甲烷的危害26-28
• 1.2 微生物的脫氯機(jī)制28-35
• 1.2.1 有機(jī)鹵化物作為碳源和能量的唯一來(lái)源29-30
• 1.2.2 微生物對(duì)有機(jī)氯化物脫氯方式舉例30-35
• 1.3 二氯甲烷生物降解菌35-38
• 1.3.1 氯代脂肪烴降解菌35-36
• 1.3.2 二氯甲烷降解菌36-38
• 1.4 二氯甲烷脫鹵素酶38-45
• 1.4.1 脫鹵酶的生化和分子特征38-40
• 1.4.2 二氯甲烷脫鹵素酶的一般性質(zhì)40-42
• 1.4.3 二氯甲烷脫鹵素酶核甘酸序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)42-43
• 1.4.4 二氯甲烷脫鹵素酶的三維結(jié)構(gòu)43-45
• 1.5 二氯甲烷生物降解關(guān)鍵酶的分子生物學(xué)研究45-46
• 1.6 二氯甲烷脫鹵素酶和GSH-S-轉(zhuǎn)移酶的進(jìn)化關(guān)系46-48
• 1.7 二氯甲烷脫鹵素酶基因表達(dá)的調(diào)控48-50
• 1.8 二氯甲烷的生物凈化原理與工藝50-55
• 1.8.1 生物法凈化二氯甲烷機(jī)理50-51
• 1.8.2 生物法凈化二氯甲烷工藝51-55
• 1.9 本研究的工作基礎(chǔ)、目的、意義和主要內(nèi)容55-58
• 1.9.1 本研究的工作基礎(chǔ)55
• 1.9.2 本研究的目的和選題意義55-56
• 1.9.3 本研究的主要內(nèi)容56-58
• 第二章 二氯甲烷降解菌株分離、鑒定及系統(tǒng)發(fā)育研究58-87
• 2.1 材料與方法58-69
• 2.1.1 材料與培養(yǎng)基58-59
• 2.1.2 試劑和儀器59
• 2.1.3 檢測(cè)方法59-60
• 2.1.4 二氯甲烷降解菌株分離與降解能力初篩60-61
• 2.1.5 降解菌株的鑒定及系統(tǒng)發(fā)育研究61-69
• 2.2 結(jié)果與討論69-84
• 2.2.1 菌株的馴化與篩選69-71
• 2.2.2 分離菌株的降解能力71-72
• 2.2.3 分離菌株的鑒定結(jié)果72-77
• 2.2.4 分離菌株的16S rDNA序列分析77-83
• 2.2.5 基于16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建83-84
• 2.3 小結(jié)84-87
• 第三章 二氯甲烷降解菌株生長(zhǎng)和降解特性研究87-105
• 3.1 材料與方法87-92
• 3.1.1 二氯甲烷降解菌株生長(zhǎng)條件研究87-88
• 3.1.2 分離菌株降解特性研究88-89
• 3.1.3 高鹽濃度下菌株WZ-12降解二氯甲烷特性89-90
• 3.1.4 二氯甲烷降解率的測(cè)定90
• 3.1.5 菌株wh22降解性質(zhì)粒特性研究90-92
• 3.2 結(jié)果與討論92-104
• 3.2.1 二氯甲烷降解菌的生長(zhǎng)條件92-94
• 3.2.2 分離菌株降解特性研究94-98
• 3.2.3 高鹽濃度下菌株WZ-12降解二氯甲烷特性98-100
• 3.2.4 菌株wh22降解性質(zhì)粒特性研究100-104
• 3.3 小結(jié)104-105
• 第四章 二氯甲烷生物降解工藝條件的優(yōu)化105-117
• 4.1 材料與方法105-108
• 4.1.1 菌株和培養(yǎng)基105-106
• 4.1.2 最佳降解條件的選擇106
• 4.1.3 搖瓶水平生物降解試驗(yàn)106
• 4.1.4 二氯甲烷的測(cè)定106-107
• 4.1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析107-108
• 4.2 結(jié)果與討論108-115
• 4.2.1 最佳降解條件108-109
• 4.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)109
• 4.2.3 搖瓶生物降解試驗(yàn)109-111
• 4.2.4 響應(yīng)面法優(yōu)化DCM好氧降解工藝111-115
• 4.2.5 對(duì)降解率回歸模型的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證115
• 4.3 小結(jié)115-117
• 第五章 二氯甲烷脫鹵酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究117-133
• 5.1 材料與方法117-121
• 5.1.1 主要儀器與試劑117-118
• 5.1.2 菌種及培養(yǎng)條件118
• 5.1.3 實(shí)驗(yàn)方法118-120
• 5.1.4 酶學(xué)性質(zhì)120-121
• 5.2 結(jié)果與討論121-131
• 5.2.1 酶的分離純化121-126
• 5.2.2 產(chǎn)酶和酶學(xué)性質(zhì)研究126-131
• 5.3 小結(jié)131-133
• 第六章 二氯甲烷脫鹵酶的基因克隆與鑒定133-158
• 6.1 材料與方法133-144
• 6.1.1 菌株、載體和試劑盒133-135
• 6.1.2 試劑和培養(yǎng)基135-136
• 6.1.3 引物設(shè)計(jì)136-137
• 6.1.4 儀器與DNA分析軟件137
• 6.1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法137-142
• 6.1.6 序列測(cè)定與系統(tǒng)發(fā)育分析142-143
• 6.1.7 同位素標(biāo)記探針制備143
• 6.1.8 Southern分子雜交143-144
• 6.2 結(jié)果與討論144-156
• 6.2.1 提取的細(xì)菌基因組的濃度144-145
• 6.2.2 PCR擴(kuò)增dcmR基因145
• 6.2.3 克隆載體pUC57構(gòu)建與鑒定145-146
• 6.2.4 表達(dá)載體的構(gòu)建與酶切鑒定146-147
• 6.2.5 目的基因的鑒定147-156
• 6.3 小結(jié)156-158
• 第七章 二氯甲烷脫鹵素酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)158-178
• 7.1 材料與方法158-168
• 7.1.1 菌株、載體和工具酶158-160
• 7.1.2 試劑和培養(yǎng)基160
• 7.1.3 引物分析設(shè)計(jì)160-161
• 7.1.4 目的基因片斷的PCR擴(kuò)增與克隆161-162
• 7.1.5 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化162-167
• 7.1.6 目的基因dcmR在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)167
• 7.1.7 重組蛋白的聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳167
• 7.1.8 表達(dá)產(chǎn)物的活性分析167-168
• 7.2 結(jié)果與討論168-177
• 7.2.1 重組表達(dá)載體的陽(yáng)性克隆檢測(cè)168-170
• 7.2.2 重組表達(dá)載體的酶切鑒定結(jié)果170-172
• 7.2.3 dcmR基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)172-176
• 7.2.4 表達(dá)產(chǎn)物二氯甲烷脫鹵素酶酶活檢測(cè)176-177
• 7.3 小結(jié)177-178
• 第八章 重組菌及其二氯甲烷脫鹵素酶的研究178-189
• 8.1 材料與方法178-180
• 8.1.1 菌株、載體和工具酶178
• 8.1.2 試劑和培養(yǎng)基178
• 8.1.3 重組子誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化178-179
• 8.1.4 二氯甲烷降解率的測(cè)定179
• 8.1.5 脫鹵素酶的活力測(cè)定179
• 8.1.6 融合蛋白的純化和堅(jiān)定179-180
• 8.1.7 融合蛋白的聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳180
• 8.1.8 重組酶的酶學(xué)性質(zhì)180
• 8.2 結(jié)果與討論180-187
• 8.2.1 重組菌株和宿主菌E.coli BL21(DE3)的生長(zhǎng)特性比較180-181
• 8.2.2 重組菌株和B.circulans WZ-12對(duì)CH_2Cl_2降解特性的比較181-182
• 8.2.3 表達(dá)初檢驗(yàn)182-183
• 8.2.4 誘導(dǎo)表達(dá)與電泳檢測(cè)183-184
• 8.2.5 重組酶的性質(zhì)184-187
• 8.3 小結(jié)187-189
• 第九章 結(jié)論與展望189-193
• 9.1 本論文主要結(jié)論189-191
• 9.2 論文創(chuàng)新點(diǎn)191-192
• 9.3 本文工作的不足及對(duì)今后工作的展望192-193
• 博士研究生學(xué)習(xí)期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文193-194
• 致謝194-195
• 參考文獻(xiàn)195-207

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混合肉肌原纖維蛋白特性研究    周亞軍;康建波;劉妍菊;蘇丹;馬龍彪;

渡夏期養(yǎng)殖刺參腐皮綜合征的發(fā)生與環(huán)境因子間的關(guān)系    黃華偉;王印庚;陳霞;張鳳萍;

現(xiàn)代化奶牛場(chǎng)乳房炎病因調(diào)查及其防治    鄔純鴻;黃毅;王文莉;鐘代彬;吳廣安;方艷軍;

畜禽糞便除臭微生物的分離與篩選    陳麗園;吳東;夏倫志;趙瑞宏;

Ectoines高效制備技術(shù)及其應(yīng)用研究    郎亞軍

轉(zhuǎn)鮭魚降鈣素基因酵母的發(fā)酵條件優(yōu)化及安全性評(píng)價(jià)    陳云松

養(yǎng)殖魚類病原菌檢測(cè)芯片技術(shù)的建立    李永芹

凍土細(xì)菌新種和冰緣植物內(nèi)生細(xì)菌新種的特征和多相分類學(xué)研究    趙祺

酪蛋白美拉德產(chǎn)物的制備、性質(zhì)及在煙草中的應(yīng)用研究    谷風(fēng)林

枯草桿菌兩步法生產(chǎn)四甲基吡嗪的調(diào)控及機(jī)制的研究    朱兵峰

粘細(xì)菌Stigmatella WXNXJ-B產(chǎn)生新型抗腫瘤抗生素的研究    王大紅

富苯丙氨酸堿性短肽的發(fā)現(xiàn)及其對(duì)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和免疫交叉反應(yīng)的影響    徐軍

Acetobacter sp. CCTCC M209061細(xì)胞催化潛手性酮不對(duì)稱還原反應(yīng)的研究    肖仔君

地下水中揮發(fā)性有機(jī)污染物的原位氣相生物修復(fù)新型技術(shù)研究    趙康

可溶性雞蛋殼膜蛋白與多肽的制備及其抗氧化活性的研究    周艷華

斑點(diǎn)叉尾鮰生魚片加工過(guò)程中的微生物變化    羅晶晶

腸道菌對(duì)蘇云金芽胞桿菌家蠶殺蟲活性的作用    郎曉磊

蘇云金芽胞桿菌對(duì)云斑天牛的抗性研究    逯晉忠

利用半夏凝集素構(gòu)建內(nèi)生工程菌及其抗同翅目害蟲效果研究    張獻(xiàn)芳

嗜熱鏈球菌抗噬菌體菌株的選育、培養(yǎng)及凍干發(fā)酵劑的研究    冷一非

新型微生態(tài)制劑的研制    韓亞超

貴州省苗族腌酸湯中產(chǎn)乳酸菌素菌的篩選與初步研究    袁瑋

黃鱔腸道菌群的初步分析和益生菌的開發(fā)與應(yīng)用研究    賀中華

黃顙魚腸道益生菌的篩選及其應(yīng)用研究    孟小亮

石油污染土壤微生物多樣性的研究技術(shù)及進(jìn)展    楊翠云;郭淑政;劉琪;劉蘇靜;苑學(xué)霞;

盤錦市典型區(qū)域土壤中石油烴的污染狀況調(diào)查與分析    田敏;張昌楠;

菲和萘在黃土上的吸附等溫線和吸附熱力學(xué)    展惠英,袁建梅,蔣煜峰,陳慧

生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)研究述評(píng)    毛小苓,倪晉仁

石油類污染物在包氣帶土層中的水化學(xué)遷移率測(cè)定    李緒謙,商書波,林亞菊,周洪義,侯戈

淺析某油田地下水石油類污染途徑    劉榮芳;陳鴻漢;王延亮;劉菲;

地下水有機(jī)污染的水文地球化學(xué)標(biāo)志物探討——以河南油田為例    郭華明,王焰新,陳艷玲,王玉梅

淺層地下水氯代烴污染天然生物降解的判別依據(jù)    何江濤,史敬華,崔衛(wèi)華,劉菲,陳鴻漢

石油污染地下水中細(xì)菌分子生態(tài)學(xué)研究    郝春博;王廣才;董建楠;張倩;蔡五田;

地下水開發(fā)引起的環(huán)境問(wèn)題與治理    方生,陳秀玲

    羅光明 魯錫榮

    本報(bào)駐南非記者 韋冬澤　苑基榮 裴廣江 本報(bào)駐比利時(shí)記者 孫天仁

組合型化學(xué)與生物反應(yīng)帶修復(fù)硝基苯、苯胺復(fù)合污染地下水研究    王顯勝

生物降解菌株Delftia tsuruhatensis AD9中染色體編碼的苯胺代謝基因簇的克隆和功能研究    梁泉峰

土壤/沉積物對(duì)揮發(fā)性有機(jī)污染物的吸附研究    殷淑華

砂土中柴油遷移土柱實(shí)驗(yàn)與反硝化條件下苯生物降解微環(huán)境實(shí)驗(yàn)研究    李東艷

垃圾滲濾液在地下環(huán)境中的氧化還原分帶及污染物的降解機(jī)理研究    董軍

珠江三角洲地區(qū)土壤和沉積物中凝聚態(tài)有機(jī)質(zhì)及其對(duì)有機(jī)污染物吸附行為的影響    孫可

石油污染土壤微生物修復(fù)的研究    李寶明

降雨對(duì)垃圾填埋場(chǎng)污染地下水氧化還原分帶及其污染物降解影響的研究    樊冬玲

山東省典型農(nóng)產(chǎn)品基地土壤微生物多樣性與地球化學(xué)元素關(guān)系研究    周娟

共存污染物對(duì)沉積物及其主要組分吸附阿特拉津的影響研究    王岙

城市生活污水中低溫高效苯酚降解菌的生理生化機(jī)制和降解特性的研究    李鳳敏

二氯甲烷降解菌的分離鑒定、微生物菌劑及基因文庫(kù)的構(gòu)建研究    胡志航

盤錦地區(qū)地震危險(xiǎn)性分析    張曉東

優(yōu)先流作用下石油類的遷移研究及模擬    孫景剛

三氯乙烯在天然土壤中的吸附行為及其影響因素    徐翯

苯酚厭氧降解菌的選育及其降酚特性    李紅梅

有機(jī)污染物菲在含水層中的遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律及其污染模擬研究    林景玉

多環(huán)芳烴菲在包氣帶中的遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律研究    付向明

高效苯酚降解菌的選育及降酚性能研究    關(guān)海濱

齊魯石化公司地下水石油污染現(xiàn)狀及污染模擬研究    高慶然

Conversion characteristics and mechanism analysis of gaseous dichloromethane degraded by a VUV light in different reaction media    

BF和BTF工藝去除DCM性能比較    潘維龍;於建明;成卓韋;蔡文吉;

Degradation of dichloromethane by an isolated strain Pandoraea pnomenusa and its performance in a biotrickling filter    Jianming Yu;Wenji Cai;Zhuowei Cheng;Jianmeng Chen;

某廢棄采油井場(chǎng)周邊土壤石油污染及微生物分布特征研究    寧卓;張翠云;張勝;劉雅慈;何澤;殷密英;

真空紫外—生物協(xié)同凈化二氯甲烷廢氣的機(jī)理研究    於建明

跨界融合構(gòu)建復(fù)合菌群高效降解制漿造紙廢水的研究    孫友友

1株三乙胺降解菌SYA-1的分離、降解性能及其動(dòng)力學(xué)研究    沈敏雅

氣態(tài)污染物的生物凈化技術(shù)及應(yīng)用    羌寧

有機(jī)廢氣的生物處理    吳玉祥;馮孝善;

揮發(fā)性有機(jī)化合物的污染與防治    洪紫萍

活性炭吸附甲苯動(dòng)力學(xué)研究    李國(guó)文,劉強(qiáng),樊青娟,蘇媚,馬廣大

乙烯及乙烯工業(yè)現(xiàn)狀    黃立道

假單胞菌DM11的二氯甲烷脫鹵素酶研究──Ⅱ．動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和抑制劑    王淑芳，蔡寶立

惡臭生物處理的研究    許景文;

生化法凈化低濃度揮發(fā)性有機(jī)廢氣的動(dòng)力學(xué)模式研究    孫珮石,楊顯萬(wàn),謝蘊(yùn)國(guó),黃若華 ,張玲琪

假單胞菌DM11菌株的二氯甲烷脫鹵素酶研究    蔡寶立;L.P.Wackett;

嗜鹽嗜堿桿菌屬的一個(gè)新種    田新玉,徐毅,劉洪燦,周培瑾

氯甲烷的海洋生物地球化學(xué)研究    陸小蘭;楊桂朋;高先池;

吹掃-捕集-氣相色譜法測(cè)定海水中氯甲烷和溴甲烷    楊桂朋;陸小蘭;宋貴生;王曉蒙;

不同緯度大氣中氯甲烷濃度的研究( 英文)    孫國(guó)忠,余琦,陳立民,李院生

氯代甲烷結(jié)構(gòu)和光譜性質(zhì)的密度泛函理論研究    陳文凱,許嬌,陸春海,徐瑾,徐偉民

以自主創(chuàng)新技術(shù) 鍛造產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)鏈    季誠(chéng)建

鹵素為人類打開一扇窗    牛水鉆;

L-薄荷基氯甲烷的合成研究    陽(yáng)年發(fā);張祚;歐陽(yáng)歆;

科技成果產(chǎn)業(yè)化潛力無(wú)窮——獲2001年杭州市科技進(jìn)步獎(jiǎng)的一等獎(jiǎng)項(xiàng)目簡(jiǎn)介    

直接法合成甲基氯硅烷    

論某些取代三芳基鹵甲烷與二烷基亞磷酸鹽的相互作用    張景齡

氯甲烷源匯分布、自然生產(chǎn)與生態(tài)調(diào)節(jié):研究概述    王進(jìn)欣;

氯甲烷加壓法合成甲胺磷    王國(guó)杰;彭順躍;

急性氯甲烷中毒27例臨床分析    何鳳云;張曉綱;何成一;王春友;

環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)在環(huán)境影響評(píng)價(jià)中的應(yīng)用    田野;趙文喜;

有機(jī)硅生產(chǎn)線節(jié)能技術(shù)的應(yīng)用    張亞娣;戴永琴;

一步法合成烯丙基聚氧化乙烯-氧化丙烯甲醚    黎松;湯四清;尹艷洪;宋曉文;

成功救治特大面積燒傷患者一例    賁道鋒;夏照帆;郇京寧;任家驃;

高效除草劑草丁膦中間體MeP(OEt)_2的合成    史鴻鑫;林輝;項(xiàng)菊萍;雷小明;徐春柳;吳蕾;

煤制甲醇項(xiàng)目簡(jiǎn)介    

國(guó)內(nèi)甲基氯硅烷合成工藝的比較    周遵石;魯建春;楊雨富;王剛;金美仙;王福民;

三農(nóng)公司實(shí)現(xiàn)氯甲烷回收    記者 羅阿華

膜法回收氯甲烷裝置研制成功    仲化

二甲基二氯硅烷接近國(guó)際先進(jìn)水平    記者 楊揚(yáng)

五通橋區(qū)在全省率先過(guò)關(guān)    朱斌袁葛強(qiáng) 記者 余向華

新安化工打官司直指侵權(quán)泛濫    翁國(guó)娟

新安化工打官司直指侵權(quán)泛濫    翁國(guó)娟

福華集團(tuán)：草甘滕項(xiàng)目試生產(chǎn)    鐘繼華 特約通訊員 袁葛強(qiáng)

讓化工產(chǎn)業(yè)與園林城市協(xié)調(diào)發(fā)展    本報(bào)記者 趙智鋼鐘華林 薛志偉

自主創(chuàng)新破除壟斷堅(jiān)冰    劉群

新安化工的循環(huán)經(jīng)濟(jì)之路    郟海燕

分子篩催化轉(zhuǎn)化氯甲烷制取低碳烯烴及其反應(yīng)機(jī)理的研究    張大治

中國(guó)東部陸架海區(qū)溴甲烷和氯甲烷的濃度分布和?！?dú)馔垦芯?nbsp;   陸小蘭

閾值光電子—光離子符合速度成像及其應(yīng)用研究    唐小鋒

氣—固相法合成氯甲烷技術(shù)研究    唐雨?yáng)|

氯甲烷尾氣深度回收方法的比較與優(yōu)化    康志鵬

草甘膦副產(chǎn)氯甲烷回收工藝的開發(fā)    翁路平

用離子交換樹脂去除三甘醇中氯離子工藝研究    王亭

丁基橡膠裝置氯甲烷脫水新工藝    王冰

氯甲烷回收過(guò)程的建模與分析    吳國(guó)權(quán)

膜法回收有機(jī)硅尾氣中氯甲烷流程設(shè)計(jì)與優(yōu)化    馮宏超

草甘膦及副產(chǎn)氯甲烷回收新工藝研究    任不凡

東海和黃海中氯甲烷和溴甲烷的分布與?！?dú)馔垦芯?nbsp;   宋貴生

甲烷液相氧化反應(yīng)產(chǎn)物處理工藝的研究    虎銳