1，2-二氯乙烷染毒對體外培養(yǎng)SW620細胞增殖、周期和凋亡的影響研究

【摘要】：[摘要]目的探討不同濃度和不同時間1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)染毒對瞬時干擾和未干擾的體外培養(yǎng)細胞增殖、周期和凋亡能力的影響。方法不同濃度1,2-DCE染毒0.5或1h, MTT(四甲基偶氮唑鹽)法檢測活細胞相對數(shù)和相對活力；流式細胞術(FCM)分析細胞周期和凋亡；siRNA瞬時干擾SIRT1表達水平；RT-PCR檢測mRNA的表達水平。結果第一部分：1,2-DCE染毒SW620細胞。MTT法檢測發(fā)現(xiàn),隨1,2-DCE染毒劑量增加和染毒時間延長,細胞相對存活率逐漸降低。與DMSO組比較,染毒0.5h,25、75、100、125、150、175、200uM組的細胞相對存活率降低(p0.05或p0.01)；染毒1h,75、100、125、150、175、200uM組的細胞相對存活率降低(p0.05或p0.01)；與0.5h各組比,175uM組染毒1h的細胞相對存活率降低(p0.01)；增殖曲線經標準化擬合后發(fā)現(xiàn),染毒0.5h,1,2-DCE的最適IC5o為89.41uM,95%的可信區(qū)間為(85.23uM,93.79uM);染毒1h,1,2-DCE的最適IC50為87.68uM,95%的可信區(qū)間為(83.71uM,91.82uM)。 FCM法檢測發(fā)現(xiàn),與對照組比較,1,2-DCE染毒1h,25、50、100、150、200uM組的Go／G1期降低(p0.05或p0.01)；25、50、100uM組的S期降低(p0.05或p0.01)；25、50、100、150、200uM組的G2／M期升高(p0.05或p0.01)；但各組均不引起細胞凋亡。第二部分：1,2-DCE染毒瞬時干擾SIRT1的SW620細胞。MTT法檢測發(fā)現(xiàn)瞬時干擾后24、48、72、96h, siRNA與對照組的細胞相對存活率的差異都有統(tǒng)計學意義,其中瞬時干擾后72h, siRNA與negative組、wild組差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)；negative組與wild組差異無統(tǒng)計學意義。MTT法檢測發(fā)現(xiàn)SIRT1瞬時干擾72h,100uM1,2-DCE染毒1h,1,2-DCE組內,siRNA組與wild組比較,有統(tǒng)計學差異(p 0.05); siRNA組內,1,2-DCE組與PBS組、DMSO組比較,有統(tǒng)計學差異(p0.05)；同時在對照組內,瞬時干擾及1,2-DCE染毒各自所造成的細胞增殖抑制情況與前期實驗結果一致。結論1,2-DCE能夠抑制體外培養(yǎng)SW620細胞增殖；染毒1小時,可使細胞周期停滯在G2／M期,但不誘導細胞凋亡；瞬時干擾SIRT1基因可使細胞增殖抑制,1,2-DCE作用瞬時干擾后的SW620細胞,兩者對細胞增殖抑制可能有疊加作用；1,2-DCE誘導體外培養(yǎng)SW620細胞增殖抑制、細胞周期時相分布改變可能與DNA損傷及修復有關。 【關鍵詞】：1 2-二氯乙烷 SIRT1 siRNA 細胞增殖 細胞周期阻滯 凋亡
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R114
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語9-11
• 1 引言11-17
• 2 材料與方法17-21
• 3 結果21-30
• 4 討論30-34
• 5 結論34-35
• 參考文獻35-39
• 綜述39-48
• 參考文獻45-48
• 作者簡歷及在讀期間所取得的科研成果48

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