糙皮側(cè)耳秸稈分解優(yōu)化菌株選育研究

【摘要】： 糙皮側(cè)耳(Pleurotus ostreatus)具有很強的木質(zhì)纖維素降解能力,自身能夠合成并分泌多種木質(zhì)纖維素降解酶。原生質(zhì)體紫外誘變育種是食用菌遺傳育種研究中一種有效的方法。因此以糙皮側(cè)耳菌株為出發(fā)菌株,利用原生質(zhì)體誘變技術(shù),選育出能夠高效分解秸稈的菌株,對開發(fā)利用富含木質(zhì)纖維素的秸稈資源具有重要意義。 首先對影響其原生質(zhì)體制備和再生的諸多因素進行了初步探索,建立了糙皮側(cè)耳原生質(zhì)體制備和再生的優(yōu)化系統(tǒng)：1%纖維素酶與1%蝸牛酶體積比為1.5：1混合,以0.6mol/L MgSO4作滲透壓穩(wěn)定劑配制酶液,作用于生長96 h的糙皮側(cè)耳菌絲,酶解溫度30℃,酶解3 h,再生滲透壓穩(wěn)定劑為甘露醇,再生培養(yǎng)基為綜合馬鈴薯培養(yǎng)基。在此優(yōu)化系統(tǒng)下,原生質(zhì)體的得率和再生率都得到了極大程度的提高,分別達到20.60×104個/mg和3.7%。 經(jīng)過原生質(zhì)體紫外誘變處理,篩選到一株木質(zhì)素、纖維素、半纖維素高降解活性菌株08P217,其木質(zhì)素酶、纖維素酶、半纖維素酶酶活性顯著高于出發(fā)菌株,且在以秸稈為主要栽培基質(zhì)的出菇實驗中較出發(fā)菌株增產(chǎn)率達10.3%。經(jīng)酯酶同工酶分析,所篩選的菌株08P217的酯酶同工酶譜不同于出發(fā)菌株的酶譜帶,二者之間存在較大差異。從而證明了08P217是一株對秸稈的降解、轉(zhuǎn)化、利用能力發(fā)生了顯著變化的優(yōu)良變異菌株。 通過對08P217的優(yōu)化栽培研究,綜合考慮生物學(xué)效率與栽培原料價格,確定其栽培基質(zhì)的最適宜麥秸添加量為40%。 對菌株08P217進行秸稈栽培料試管長速穩(wěn)定性檢測、木質(zhì)素、纖維素、半纖維素降解率穩(wěn)定性檢測、生物學(xué)效率穩(wěn)定性檢測。結(jié)果表明08P217較穩(wěn)定,是可以進行推廣的優(yōu)良菌株。 【關(guān)鍵詞】：糙皮側(cè)耳 菌株選育 原生質(zhì)體誘變 秸稈分解
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：S646.14
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 第1章 文獻綜述12-20
• 1.1 引言12
• 1.2 糙皮側(cè)耳概述12-13
• 1.3 食用菌育種技術(shù)13-15
• 1.3.1 野生馴化13-14
• 1.3.2 單孢分離14
• 1.3.3 雜交育種14
• 1.3.4 誘變育種14-15
• 1.3.5 原生質(zhì)體融合技術(shù)15
• 1.3.6 轉(zhuǎn)基因技術(shù)15
• 1.4 酯酶同工酶技術(shù)15-16
• 1.5 秸稈資源綜合利用16-18
• 1.5.1 秸稈資源簡介16
• 1.5.2 現(xiàn)有秸稈資源的主要利用方式16-18
• 1.6 研究目的、意義、研究內(nèi)容及特點18-19
• 1.6.1 研究目的18
• 1.6.2 研究意義18
• 1.6.3 研究內(nèi)容及特點18-19
• 1.7 技術(shù)路線19-20
• 第2章 糙皮側(cè)耳原生質(zhì)體制備與再生條件的優(yōu)化研究20-29
• 2.1 引言20
• 2.2 實驗材料20-21
• 2.2.1 供試菌株20
• 2.2.2 培養(yǎng)基20
• 2.2.3 實驗試劑20-21
• 2.2.4 主要儀器設(shè)備21
• 2.3 實驗方法21-23
• 2.3.1 原生質(zhì)體制備和再生的基本方法21-22
• 2.3.2 糙皮側(cè)耳原生質(zhì)體的制備及再生條件的優(yōu)化22-23
• 2.4 實驗結(jié)果與分析23-28
• 2.4.1 原生質(zhì)體的形成23-24
• 2.4.2 酶種類對原生質(zhì)體得率的影響24
• 2.4.3 菌齡對原生質(zhì)體得率的影響24-25
• 2.4.4 滲透壓穩(wěn)定劑種類對原生質(zhì)體得率的影響25
• 2.4.5 酶解時間對原生質(zhì)體得率的影響25
• 2.4.6 酶解溫度對原生質(zhì)體得率的影響25-26
• 2.4.7 滲透壓穩(wěn)定劑對原生質(zhì)體再生的影響26
• 2.4.8 再生培養(yǎng)基對原生質(zhì)體再生的影響26
• 2.4.9 原生質(zhì)體制備與再生最佳條件的正交實驗26-28
• 2.5 小結(jié)28-29
• 第3章 糙皮側(cè)耳原生質(zhì)體紫外誘變29-32
• 3.1 引言29
• 3.2 實驗材料29-30
• 3.2.1 供試菌株29
• 3.2.2 培養(yǎng)基29
• 3.2.3 實驗試劑29
• 3.2.4 主要儀器設(shè)備29-30
• 3.3 實驗方法30
• 3.3.1 原生質(zhì)體的制備30
• 3.3.2 紫外線對原生質(zhì)體的誘變效應(yīng)及紫外線誘變劑量的選擇30
• 3.3.3 原生質(zhì)體的紫外誘變30
• 3.4 實驗結(jié)果與分析30-31
• 3.4.1 原生質(zhì)體紫外線誘變曲線及紫外線誘變劑量的選擇30-31
• 3.4.2 原生質(zhì)體的紫外誘變31
• 3.5 小結(jié)31-32
• 第4章 再生變異株中秸稈分解優(yōu)良菌株的篩選32-44
• 4.1 引言32
• 4.2 實驗材料32-33
• 4.2.1 供試菌株32
• 4.2.2 培養(yǎng)基32
• 4.2.3 主要儀器設(shè)備32
• 4.2.4 數(shù)據(jù)處理軟件32-33
• 4.3 實驗方法33-38
• 4.3.1 糙皮側(cè)耳秸稈分解菌株的初篩33
• 4.3.2 糙皮側(cè)耳秸稈分解菌株的復(fù)篩33
• 4.3.3 復(fù)篩菌株木質(zhì)素,纖維素,半纖維素酶活比較33-36
• 4.3.4 復(fù)篩菌株木質(zhì)素,纖維素,半纖維素降解率比較36-38
• 4.4 實驗結(jié)果與分析38-43
• 4.4.1 糙皮側(cè)耳秸稈降解菌株的初篩38-39
• 4.4.2 糙皮側(cè)耳秸稈降解菌株的復(fù)篩39-41
• 4.4.3 復(fù)篩菌株木質(zhì)素,纖維素,半纖維素酶活比較41-42
• 4.4.4 復(fù)篩菌株木質(zhì)素,纖維素,半纖維素降解率比較42-43
• 4.5 小結(jié)43-44
• 第5章 再生變異株中秸稈栽培優(yōu)良菌株的篩選44-50
• 5.1 引言44
• 5.2 實驗材料44-45
• 5.2.1 供試菌株44
• 5.2.2 培養(yǎng)基44
• 5.2.3 主要儀器設(shè)備44
• 5.2.4 數(shù)據(jù)處理軟件44-45
• 5.3 實驗方法45
• 5.4 實驗結(jié)果與分析45-49
• 5.4.1 生長周期的比較45-47
• 5.4.2 生物學(xué)效率的比較47-48
• 5.4.3 子實體農(nóng)藝性狀的比較48-49
• 5.5 小結(jié)49-50
• 第6章 再生變異株的鑒定50-54
• 6.1 引言50
• 6.2 實驗材料50-51
• 6.2.1 供試菌株50
• 6.2.2 主要儀器設(shè)備50
• 6.2.3 溶液配制50-51
• 6.3 實驗方法51-52
• 6.3.1 酯酶提取液的制備51
• 6.3.2 制膠及電泳51
• 6.3.3 染色51-52
• 6.3.4 觀察與記錄52
• 6.4 實驗結(jié)果與分析52-53
• 6.5 小結(jié)53-54
• 第7章 再生變異株08P217優(yōu)化栽培研究54-58
• 7.1 引言54
• 7.2 實驗材料54
• 7.2.1 供試菌株54
• 7.2.2 培養(yǎng)基54
• 7.2.3 主要儀器設(shè)備54
• 7.2.4 數(shù)據(jù)處理軟件54
• 7.3 實驗方法54-55
• 7.4 實驗結(jié)果分析55-57
• 7.4.1 不同麥秸添加量栽培料滿袋天數(shù)比較55-56
• 7.4.2 不同麥秸添加量栽培料生物學(xué)效率比較56-57
• 7.5 小結(jié)57-58
• 第8章 再生變異菌株08P217遺傳穩(wěn)定性研究58-62
• 8.1 引言58
• 8.2 實驗方法58
• 8.2.1 組織分離58
• 8.2.2 秸稈栽培料試管長速穩(wěn)定性檢測58
• 8.2.3 木質(zhì)素、纖維素、半纖維素降解率穩(wěn)定性檢測58
• 8.2.4 生物學(xué)效率穩(wěn)定性檢測58
• 8.3 實驗結(jié)果與分析58-60
• 8.3.1 秸稈栽培料試管長速穩(wěn)定性檢測58-59
• 8.3.2 木質(zhì)素、纖維素、半纖維素降解率穩(wěn)定性檢測59-60
• 8.3.3 生物學(xué)效率穩(wěn)定性檢測60
• 8.4 小結(jié)60-62
• 第9章 結(jié)論62-63
• 參考文獻63-67
• 致謝67-68
• 攻讀學(xué)位期間取得的科研成果68

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