水稻秸稈纖維素發(fā)酵轉(zhuǎn)化燃料乙醇的研究

【摘要】： 我國(guó)水稻秸稈資源豐富,年產(chǎn)量達(dá)3億多噸。利用水稻秸稈生產(chǎn)燃料乙醇,對(duì)解決未來我國(guó)能源問題、實(shí)現(xiàn)節(jié)糧代糧和環(huán)保有著巨大的潛力和廣闊的應(yīng)用前景。水稻秸稈的主要成分是纖維素,對(duì)纖維素的利用最主要的限制性因素是將纖維素轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵還原糖。解決的辦法主要有兩類途徑:(1)提高纖維素酶生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)性,主要涉及纖維素酶高產(chǎn)菌的獲得及纖維素酶的生產(chǎn)技術(shù),提高其合成效率以降低單位纖維素酶生產(chǎn)成本;(2)提高纖維素酶利用效率,主要涉及纖維素酶解催化過程,以降低單位可發(fā)酵還原糖生產(chǎn)成本。因此,本研究從菌種的選育著手,研究了菌株的產(chǎn)酶特性,用響應(yīng)面策略優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基,形成了5L發(fā)酵罐分批發(fā)酵生產(chǎn)高活力纖維素酶技術(shù);分離純化了纖維素酶;構(gòu)建了代謝纖維二糖的釀酒酵母工程菌;對(duì)釀酒酵母工程菌細(xì)胞固定化發(fā)酵進(jìn)行了研究,利用二級(jí)串聯(lián)式生物反應(yīng)器耦合系統(tǒng)生物協(xié)同酶解水稻秸稈發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇等。主要研究結(jié)果如下: 1.篩選到一株纖維素酶高產(chǎn)菌株(Penicillium YT01),原生質(zhì)體紫外誘變后得到突變株YT02,YT02以水稻秸稈為碳源,豆餅粉和硫酸銨為氮源,在29℃,初始pH6.0發(fā)酵120 h,纖維素酶活力達(dá)到最高,搖瓶發(fā)酵濾紙酶活(FPA)、CMC酶活(CMCase)和β-葡萄糖苷酶活(CB)分別達(dá)3.86 IU/mL、207.41 IU/mL和1.40 IU/mL。 2.用響應(yīng)面方法(RSM)優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:水稻秸稈為41.95g/L,豆餅粉為24.83g/L,麩皮為22.16 g/L,(NH_4)_2SO_4、KH_2PO_4為4g/L,MgSO_4為0.5g/L;起始pH6.0。以優(yōu)化的培養(yǎng)基發(fā)酵120 h,濾紙酶活、CMC酶活和β-葡萄糖苷酶活分別達(dá)到8.8967IU/mL、357.41 IU/mL and 3.704 IU/mL。遠(yuǎn)高于優(yōu)化前的纖維素酶活水平。 3.在5L發(fā)酵罐中研究了溫度、pH值和溶氧對(duì)菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)酶的影響,確定了分批發(fā)酵的工藝條件為:0-32 h時(shí)發(fā)酵溫度32℃,溶氧70%;32 h至120 h發(fā)酵結(jié)果發(fā)酵溫度29℃,溶氧50%,發(fā)酵液初始pH值6.0,發(fā)酵96 h濾紙酶活、CMC酶活和β-葡萄糖苷酶活分別達(dá)到11.13 IU/mL、465.24 IU/mL and 4.08 IU/mL,均高于搖瓶發(fā)酵水平,分批發(fā)酵動(dòng)力學(xué)過程顯示,突變菌YT02菌體生長(zhǎng)和纖維素酶各組分均為部分耦聯(lián)。 4.利用DEAE Sephadex A-25和Sephadex G-75分離純化了二個(gè)內(nèi)切葡聚糖酶(CMCase)和一個(gè)β-葡萄糖苷酶,CMCase純化倍數(shù)為13.48,回收率為10.54%,β-葡萄糖苷酶純化倍數(shù)為18.62,回收率為8.62%,經(jīng)SDS-PAGE得到單蛋白分子條帶,經(jīng)分子量測(cè)定分別為73 kDa、43 kDa和57.8 kDa,并對(duì)其進(jìn)行了N端測(cè)序和質(zhì)譜分析。 5.以生產(chǎn)乙醇性能優(yōu)良的釀酒酵母菌株NAN-27作為工程菌株的受體菌。利用穩(wěn)定性能良好的多拷貝整合型載體pYMIKP,使纖維二糖代謝基因BGL1整合到釀酒酵母的染色體上。從而在釀酒酵母工業(yè)菌株中建立了穩(wěn)定的纖維二糖代謝途徑,拓展了酒精生產(chǎn)的底物利用范圍,降低了纖維二糖對(duì)纖維素酶解的抑制作用。采用海藻酸鈣凝膠包埋固定代謝纖維二糖釀酒酵母工程菌,固定化細(xì)胞與游離細(xì)胞相比,發(fā)酵時(shí)間縮短,乙醇產(chǎn)率提高20%以上,并能有效地利用水稻秸稈水解液進(jìn)行酒精發(fā)酵。 6.對(duì)水稻秸稈酶解過程中底物性質(zhì)、酶解溫度、酶解pH、底物濃度及纖維素酶用量等關(guān)鍵因子進(jìn)行了研究。由于YT02纖維素酶系中纖維二糖酶活力較低(CB/FPA為0.38),經(jīng)稀酸稀堿預(yù)處理后的水稻秸稈纖維素對(duì)乙醇轉(zhuǎn)化率僅為18%。采用代謝纖維二糖釀酒酵母工程菌游離細(xì)胞發(fā)酵,可部分去除纖維二糖對(duì)酶解的抑制,水稻秸稈纖維素對(duì)乙醇轉(zhuǎn)化率可提高至20%。進(jìn)一步利用采用海藻酸鈣凝膠包埋固定代謝纖維二糖釀酒酵母工程菌發(fā)酵,水稻秸稈纖維素對(duì)乙醇轉(zhuǎn)化率可達(dá)26%。這方面的研究結(jié)果有助于深入了解纖維素酶的協(xié)同降解機(jī)制。 7.將纖維原料的酶解、固定化代謝纖維二糖釀酒酵母工程菌的作用有機(jī)耦聯(lián),構(gòu)建成新型的二級(jí)串聯(lián)式生物反應(yīng)器,在該反應(yīng)器體系的協(xié)同作用下,可有效解除纖維二糖和葡萄糖對(duì)纖維素酶的反饋抑制作用,促進(jìn)纖維原料水稻秸稈的酶水解,發(fā)酵40 h,乙醇濃度達(dá)25.5g/L,纖維素對(duì)乙醇的轉(zhuǎn)化率達(dá)43.0%(纖維素對(duì)乙醇的理論轉(zhuǎn)化率為56.61%),是游離細(xì)胞同時(shí)糖化發(fā)酵(SSF)的1.65倍,生產(chǎn)效率達(dá)0.64g/(L·h)。采用分批添料式協(xié)同酶解發(fā)酵工藝,可提高纖維底物的終濃度達(dá)250g/L,產(chǎn)物乙醇的終濃度66.51g/L,有效提高了纖維素酶的利用率和乙醇生產(chǎn)效率,降低乙醇的生產(chǎn)成本。該反應(yīng)器性能穩(wěn)定,反應(yīng)效率高,固定化細(xì)胞可以重復(fù)使用,便于自動(dòng)化控制。 【關(guān)鍵詞】：纖維素酶 水稻秸稈 釀酒酵母 燃料乙醇 串聯(lián)式生物反應(yīng)器
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：S216.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-16
• 第一章 文獻(xiàn)綜述16-38
• 1 水稻秸稈資源及其降解方式16-21
• 1.1 水稻秸稈的組成與結(jié)構(gòu)16-18
• 1.2 水稻秸稈的預(yù)處理18-19
• 1.2.1 物理方法預(yù)處理水稻秸稈18
• 1.2.2 化學(xué)方法預(yù)處理水稻秸稈18-19
• 1.2.3 生物方法預(yù)處理水稻秸稈19
• 1.3 水稻秸稈纖維素的降解方式19-21
• 1.3.1 水稻秸稈的酸水解20
• 1.3.2 水稻秸稈的酶水解20-21
• 2 纖維素酶的性質(zhì)與用途21-27
• 2.1 纖維素酶的多酶體系21-22
• 2.2 纖維素酶的分子結(jié)構(gòu)22-24
• 2.3 纖維素酶的作用機(jī)理24-25
• 2.4 纖維素酶的分子量大小25-26
• 2.5 纖維素酶的最適反應(yīng)條件與穩(wěn)定性26
• 2.6 纖維素酶的應(yīng)用26-27
• 3 纖維素酶的生產(chǎn)27-30
• 3.1 纖維素酶的生產(chǎn)菌種選育27-29
• 3.2 纖維素酶的生產(chǎn)29-30
• 4 水稻秸稈原料生物轉(zhuǎn)化燃料乙醇30-34
• 4.1 燃料乙醇的優(yōu)越性和使用現(xiàn)狀30-31
• 4.2 水稻秸稈纖維素生物轉(zhuǎn)化燃料乙醇的方法31-32
• 4.2.1 分步水解發(fā)酵法生產(chǎn)燃料乙醇31
• 4.2.2 同步糖化發(fā)酵法生產(chǎn)燃料乙醇31-32
• 4.2.3 固定化細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇32
• 4.3 釀酒酵母途徑工程應(yīng)用于燃料乙醇的生產(chǎn)32-34
• 5 本研究的目的、意義和主要內(nèi)容34-38
• 5.1 本研究的目的和意義34-35
• 5.2 本研究的思路和技術(shù)路線35-36
• 5.3 本研究的主要內(nèi)容36-38
• 第二章 纖維素酶高產(chǎn)菌株的選育及產(chǎn)酶條件研究38-60
• 1 材料與方法38-44
• 1.1 材料38-40
• 1.1.1 試劑與溶液配制38-39
• 1.1.2 菌種與菌種分離源39
• 1.1.3 培養(yǎng)基39-40
• 1.1.4 主要儀器與設(shè)備40
• 1.2 方法40-44
• 1.2.1 水稻秸稈的預(yù)處理40
• 1.2.2 纖維素酶高產(chǎn)菌的分離與純化40
• 1.2.3 纖維素酶高產(chǎn)菌的初步鑒定40
• 1.2.4 纖維素酶高產(chǎn)菌的原生質(zhì)體紫外誘變40-41
• 1.2.5 YT02產(chǎn)纖維素酶的液體發(fā)酵培養(yǎng)方法41-42
• 1.2.6 不同預(yù)處理水稻秸稈的酶水解42
• 1.2.7 分析方法42-44
• 2 結(jié)果與分析44-58
• 2.1 不同預(yù)處理水稻秸稈的各組分含量44
• 2.2 纖維素酶高產(chǎn)菌的分離與篩選44-46
• 2.3 纖維素高產(chǎn)菌YT01的菌種鑒定46
• 2.4 纖維素酶高產(chǎn)菌YT01的原生質(zhì)體紫外誘變46-47
• 2.5 液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分與發(fā)酵條件對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響47-56
• 2.5.1 不同碳源對(duì)YT02產(chǎn)酶的影響47-48
• 2.5.2 不同預(yù)處理水稻秸稈對(duì)YT02產(chǎn)酶的影響48-49
• 2.5.3 不同氮源對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響49-50
• 2.5.4 微晶纖維素添加量對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響50
• 2.5.5 不同無機(jī)鹽對(duì)YT01產(chǎn)纖維素酶的影響50-51
• 2.5.6 起始pH對(duì)YT01產(chǎn)纖維素酶的影響51-52
• 2.5.7 裝液量對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響52
• 2.5.8 轉(zhuǎn)速對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響52-53
• 2.5.9 培養(yǎng)溫度對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響53-54
• 2.5.10 接種量對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響54-55
• 2.5.11 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)YT02產(chǎn)酶的影響55-56
• 2.6 纖維素酶的酶學(xué)性質(zhì)研究56-57
• 2.6.1 溫度對(duì)纖維素酶各組分酶活的影響56
• 2.6.2 pH對(duì)纖維素酶各組分酶活的影響56-57
• 2.7 纖維素酶對(duì)不同預(yù)處理水稻秸稈的酶解試驗(yàn)57-58
• 3 結(jié)論與討論58-60
• 3.1 關(guān)于篩選出的纖維素酶高產(chǎn)菌株58
• 3.2 纖維素酶生產(chǎn)菌的改造58-59
• 3.3 青霉YT02產(chǎn)酶條件與酶學(xué)特性59-60
• 第三章 YT02產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化研究60-78
• 1 材料與方法60-62
• 1.1 材料60-61
• 1.1.1 試劑60
• 1.1.2 供試菌種60
• 1.1.3 培養(yǎng)基60-61
• 1.1.4 主要儀器與設(shè)備61
• 1.2 方法61-62
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)61
• 1.2.2 培養(yǎng)方法61
• 1.2.3 分析方法61-62
• 2 結(jié)果與分析62-76
• 2.1 部分因子實(shí)驗(yàn)篩選發(fā)酵培養(yǎng)基的主要影響因子62-65
• 2.2 最陡爬坡實(shí)驗(yàn)逼近發(fā)酵培養(yǎng)基最優(yōu)點(diǎn)65-66
• 2.3 中心組合設(shè)計(jì)優(yōu)化YT02發(fā)酵培養(yǎng)基組成66-74
• 2.4 發(fā)酵過程中pH、殘余還原糖與纖維素酶變化的測(cè)定結(jié)果74-76
• 3 結(jié)論與討論76-78
• 第四章 YT02分批發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的研究78-91
• 1 材料與方法78-80
• 1.1 材料78-79
• 1.1.1 試劑78
• 1.1.2 菌株78-79
• 1.1.3 培養(yǎng)基79
• 1.1.4 主要儀器79
• 1.2 方法79-80
• 1.2.1 用于分批發(fā)酵的種子培養(yǎng)79
• 1.2.2 恒溫分批發(fā)酵對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響79
• 1.2.3 變溫分批發(fā)酵對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響79
• 1.2.4 溶氧量對(duì)YT02分批發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的影響79-80
• 1.2.5 分段溶氧對(duì)YT02分批發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的影響80
• 1.2.6 分析方法80
• 2 結(jié)果與分析80-88
• 2.1 發(fā)酵溫度對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響結(jié)果80-83
• 2.2 變溫發(fā)酵對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響結(jié)果83-84
• 2.3 溶氧對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響結(jié)果84-87
• 2.4 分段溶氧分批發(fā)酵對(duì)YT02產(chǎn)纖維素酶的影響結(jié)果87-88
• 3 結(jié)論與討論88-91
• 第五章 YT02產(chǎn)纖維素酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究91-111
• 1 材料與方法91-102
• 1.1 材料91-93
• 1.1.1 試驗(yàn)材料91
• 1.1.2 主要試劑91-92
• 1.1.3 常用儲(chǔ)備液及緩沖液92-93
• 1.1.4 主要儀器93
• 1.2 方法93-102
• 1.2.1 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定方法93-94
• 1.2.2 纖維素酶的分離純化94-98
• 1.2.3 纖維素酶SDS-PAGE凝膠電泳純化及酶相對(duì)分子量的測(cè)定98-100
• 1.2.4 酶蛋白的N端測(cè)序100-101
• 1.2.5 酶蛋白的質(zhì)譜分析101-102
• 2 結(jié)果與分析102-109
• 2.1 DEAE-Sephadex A-25陰離子交換層析結(jié)果102-103
• 2.1.1 層析收集管酶蛋白同洗脫緩沖液NaCl濃度的關(guān)系102-103
• 2.1.2 層析收集管酶蛋白活性檢測(cè)103
• 2.2 Sephadex G-75分子篩凝膠過濾層析結(jié)果103-104
• 2.2.1 Sephadex G-75分子篩凝膠過濾層析分離酶蛋白103
• 2.2.2 分子篩凝膠過濾層析纖維素酶活測(cè)定結(jié)果103-104
• 2.3 纖維素酶各純化步驟純化情況104-105
• 2.4 SDS-PAGE聚丙烯酸胺凝膠電泳105-106
• 2.4.1 SDS-PAGE聚丙烯酸胺凝膠電泳銀染結(jié)果105-106
• 2.4.2 纖維素酶分子量SDS-PAGE凝膠電泳測(cè)定結(jié)果106
• 2.5 酶蛋白的N端測(cè)序結(jié)果106-108
• 2.6 酶蛋白的質(zhì)譜分析結(jié)果108-109
• 3 結(jié)論與討論109-111
• 第六章 釀酒酵母纖維二糖代謝途徑的構(gòu)建及其細(xì)胞固定化研究111-127
• 1 材料和方法111-118
• 1.1 材料111-113
• 1.1.1 菌株和質(zhì)粒111
• 1.1.2 分子克隆用酶和試劑111-112
• 1.1.3 水稻秸稈水解液的制備112-113
• 1.2 方法113-118
• 1.2.1 含纖維二糖酶基因(BGL1)的重組質(zhì)粒pYMIKP-BGL1的構(gòu)建方法113-114
• 1.2.2 釀酒酵母纖維二糖代謝途徑的搭建方法114-116
• 1.2.3 釀酒酵母工程菌細(xì)胞的固定化方法116-117
• 1.2.4 固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵方法117
• 1.2.5 分析方法117-118
• 2 結(jié)果與分析118-123
• 2.1 表達(dá)BGL1基因的重組菌株的構(gòu)建結(jié)果118-120
• 2.1.1 目的基因BGL1的獲得118
• 2.1.2 含目的基因BGL1重組質(zhì)粒的構(gòu)建118-119
• 2.1.3 釀酒酵母工業(yè)菌株NAN-27轉(zhuǎn)化子的獲得119
• 2.1.4 轉(zhuǎn)化子NAN-28細(xì)胞纖維二糖酶活性測(cè)定結(jié)果119-120
• 2.2 不同固定化條件對(duì)NAN-28細(xì)胞固定化的影響結(jié)果120-121
• 2.2.1 不同溶劑對(duì)固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化纖維二搪的測(cè)定結(jié)果120
• 2.2.2 不同海藻酸鈉濃度對(duì)固定化細(xì)胞凝膠特性的影響120-121
• 2.2.3 酵母包埋量對(duì)固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化纖維二糖的影響結(jié)果121
• 2.3 固定化細(xì)胞與游離細(xì)胞分批發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果121-122
• 2.4 固定化細(xì)胞重復(fù)分批發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果122-123
• 3 結(jié)論與討論123-127
• 3.1 釀酒酵母纖維二糖代謝途徑的構(gòu)建123-125
• 3.2 釀酒酵母工程菌細(xì)胞固定化125-127
• 第七章 串聯(lián)式生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)化水稻秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的研究127-139
• 1 材料與方法127-131
• 1.1 材料127
• 1.1.1 試劑127
• 1.1.2 菌種127
• 1.1.3 主要儀器與設(shè)備127
• 1.2 方法127-131
• 1.2.1 稻草粉的預(yù)處理127-128
• 1.2.2 纖維素酶的制備128
• 1.2.3 稻草粉的酶解糖化128-129
• 1.2.4 水稻秸稈生物轉(zhuǎn)化燃料乙醇129-130
• 1.2.5 測(cè)定方法130-131
• 2 結(jié)果與分析131-137
• 2.1 不同預(yù)處理方法對(duì)水稻秸稈糖化效果的影響結(jié)果131
• 2.2 不同溫度對(duì)水稻秸稈糖化效果的影響結(jié)果131-132
• 2.3 不同pH對(duì)稻草粉糖化效果的影響結(jié)果132-133
• 2.4 不同加酶量對(duì)稻草粉糖化效果的影響結(jié)果133
• 2.5 不同底物濃度對(duì)稻草粉糖化效果的影響結(jié)果133-134
• 2.6 水稻秸稈同步糖化發(fā)酵(SSF)結(jié)果134-135
• 2.7 串聯(lián)式反應(yīng)器轉(zhuǎn)化水稻秸稈生產(chǎn)乙醇135-137
• 2.7.1 固定化NAN-28細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇結(jié)果135-136
• 2.7.2 串聯(lián)式生物反應(yīng)器的穩(wěn)定性結(jié)果136-137
• 2.7.3 分批添料式協(xié)同酶解發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇結(jié)果137
• 3 結(jié)論與討論137-139
• 3.1 二級(jí)串聯(lián)式生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙醇137-138
• 3.2 分批添料式協(xié)同酶解發(fā)酵工藝138
• 3.3 水稻秸稈資源的全利用138-139
• 第八章 結(jié)論139-141
• 主要參考文獻(xiàn)141-161
• 英文縮寫與主要符號(hào)表161-162
• 本研究的特色與創(chuàng)新162-163
• 發(fā)表與待發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及成果163-164
• 致謝164-165
• 作者簡(jiǎn)介165

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不同預(yù)處理提高棉花秸稈還原糖酶解效果的研究    吳書奇;馬金萍;王家佳;席琳喬;史卉玲;張玲;馬春暉;

紅麻骨纖維質(zhì)轉(zhuǎn)化燃料乙醇的關(guān)鍵技術(shù)研究    阮奇城

支持向量回歸解釋性體系的建立及應(yīng)用    譚顯勝

能源植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與堿處理降解轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究    徐寧

生物質(zhì)糖化和乙醇發(fā)酵菌種資源的研究    張立

直接降解稻草秸稈的菌株篩選及其發(fā)酵過程研究    金顯春;郭文杰;楊勇;陶文沂;

細(xì)胞融合技術(shù)研究進(jìn)展    崔彬彬;朱維紅;馮大領(lǐng);

瘤胃微生物纖維素酶的研究與應(yīng)用前景    藍(lán)賢勇,陳宏,張潤(rùn)鋒,田燚

利用纖維原料在串聯(lián)式生物反應(yīng)器中協(xié)同酶解發(fā)酵乳酸    沈雪亮,夏黎明

纖維素酶研究綜述    王巧蘭,郭剛,林范學(xué)

分解酒糟生物質(zhì)的纖維素酶生產(chǎn)菌的篩選研究    江龍法;錢志剛;夏澤華;李加坤;張紅;

降解秸稈的纖維素酶高產(chǎn)菌的選育    王慧杰;張曉靜;

纖維素科學(xué)及纖維素酶的研究進(jìn)展    汪維云,朱金華,吳守一

黑曲霉β-葡萄糖苷酶穩(wěn)定性的研究    楊陽(yáng);任大明;

纖維素酶菌株的選育及其產(chǎn)酶條件    張年鳳,趙允麟

幾種農(nóng)藥對(duì)雙季稻區(qū)厭氧纖維分解菌活力的影響    劉金勝;廖曉蘭;黃璜;

一株高效秸稈纖維素降解真菌的分離、鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析    李方正;唐亮;趙建文;王文娟;趙宏坤;

山東省主產(chǎn)煙區(qū)煙草炭疽病菌的鑒定與分子檢測(cè)    賈玉;鄭翠梅;張廣民;陳秀亭;溫亮;田福海;楊永花;

蘆筍老莖堆肥中高溫纖維素分解菌的分離、篩選及鑒定    李欣欣;王琳琳;申挺挺;宋志剛;韓建榮;

鋁合金的微生物腐蝕及預(yù)防措施    胡濱,劉敏,邵偉

超聲波協(xié)同稀堿液處理稻草秸稈酶解糖化的研究    胡華佳;姚日生;鄧勝松;李曼曼;李鳳和;

灰葡萄孢生理與形態(tài)特征    張繼民

休哈塔假絲酵母發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇的研究    周逢云;湯斌;張慶慶;陳阿娜;翟光雯;陳中碧;

麥秸稈稀酸水解條件的研究    程旺開;湯斌;張慶慶;陳阿娜;翟光雯;周逢云;陳中碧;

稻草秸稈預(yù)處理實(shí)驗(yàn)研究    葉生梅;

新型抑菌劑K系(K1、K2、K3)對(duì)煙草青枯菌的抑制作用研究(Ⅰ)    趙志峰;楊梅林;羅正友;劉臻真;余夏薇;李艷林;劉義新;

葡萄褐斑病研究進(jìn)展    梁春浩;趙奎華;劉長(zhǎng)遠(yuǎn);王璐;

綠液預(yù)處理對(duì)麥草化學(xué)成分及酶水解糖化的影響    黃婷;陸青山;金永燦;谷峰;張厚民;Hasan Jameel;Richard Phillips;李忠正;

西瓜霜發(fā)酵菌株的分離和鑒定    王秋紅;匡海學(xué);辛萍;王長(zhǎng)福;姜海;李艷鳳;

云南高寒地區(qū)蟲生真菌資源    楊大榮;李朝達(dá);楊躍雄;舒暢;

杭州地區(qū)柑橘害蟲病原真菌調(diào)查    葉琪明;王健;王拱辰;

海洋微生物復(fù)合制劑改善桉樹人工林土壤質(zhì)量研究    胡治剛;胡江春;劉麗;汪思龍;蘇振飛;王書錦;

纖維素酶及其在廢木質(zhì)纖維素制可還原糖中的應(yīng)用    姜曉云;王家德;

幾種能源草中化學(xué)成分利用指數(shù)分析    李峰;王宗禮;孫啟忠;

飼用纖維素酶固態(tài)發(fā)酵的研究    皮雄娥;李孝輝;費(fèi)笛波;

嗜熱真菌糖苷酶的基因克隆、表達(dá)與分子改造    徐榮燕

嗜熱真菌熱穩(wěn)定幾丁質(zhì)酶基因的克隆、表達(dá)與分子改造    張婕

東祁連山高寒草地土壤真菌多樣性研究    張俊忠

海洋季也蒙畢赤酵母重組菊粉酶及其在產(chǎn)乙醇中的應(yīng)用    張曈

白地霉脂肪酶的制備、修飾改良及應(yīng)用研究    閻金勇

紅球菌P450硫醚單加氧酶的克隆表征及應(yīng)用研究    張建棟

廢紙二次纖維氰乙基化改性及制備復(fù)合材料的研究    張春紅

利用黃瓜幼苗內(nèi)生真菌種子處理防治南方根結(jié)線蟲的研究    鄢小寧

大豆分離蛋白抑菌膜性能評(píng)價(jià)及抑菌劑釋放研究    陳默

稻草秸稈的預(yù)處理及生產(chǎn)乙醇的研究    孫萬里

產(chǎn)聚半乳糖醛酸酶菌株的篩選、發(fā)酵條件及酶學(xué)性質(zhì)的研究    胡慧磊

高產(chǎn)胞外多糖乳酸乳桿菌的選育及其發(fā)酵條件的優(yōu)化    陳若雯

柑橘果實(shí)化渣性研究    雷瑩

梨抗黑星病類似基因Hcrp和啟動(dòng)子克隆與類受體蛋白分析    李智

深海細(xì)菌Martelella mediterranea纖維素酶基因的克隆、表達(dá)與酶學(xué)分析    董俊麗

亮斑扁角水虻（Hermetia illucens L.）幼蟲腸道內(nèi)纖維素酶活性菌株的篩選與鑒定    謝久鳳

霉豆渣粑發(fā)酵過程中營(yíng)養(yǎng)及風(fēng)味成分變化研究    姚英政

腌制蘿卜工藝及黃變與脆度的關(guān)系研究    姚利玄

多拉菌素產(chǎn)生菌的誘變育種及培養(yǎng)條件的優(yōu)化    吳婕

畢赤酵母木糖還原酶的改造及重組釀酒酵母發(fā)酵木糖生產(chǎn)乙醇的初步研究    董莉莉

棉花秸稈作為綿羊粗飼料的研究    魏敏,雒秋江,王東寶,朱文濤,潘繼修

基于多類支持向量機(jī)的遙感圖像分類及其半監(jiān)督式改進(jìn)策略    祁亨年,楊建剛,方陸明

飼用纖維素酶活力測(cè)定方法的探討    劉德海,楊玉華,張發(fā)旺,陳小鴿,李新杰

支持向量機(jī)訓(xùn)練算法研究    馬海興;

一株纖維素降解菌株的分離鑒定及產(chǎn)酶特征研究    尹礎(chǔ);夏樂先;柳建設(shè);張維新;吳發(fā)登;邱冠周;

紅麻新品種福紅952的選育    祁建民,林荔輝,林培青,李愛青,吳為人,陳啟鋒,周元昌,潘潤(rùn)森,蔡金月

優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)紅麻品種福紅951的選育    祁建民,林荔輝,林培青,周元昌,方平平,蔡金月,林娜,李愛青

鳳尾菇漆酶性質(zhì)及應(yīng)用的研究    朱海瀟;黃桂英;王霖;顏松;胡開輝;

基于SVR和k-近鄰群的組合預(yù)測(cè)在QSAR中的應(yīng)用    袁哲明;熊潔儀;張永生;

紡織生物助劑果膠酶酶活的測(cè)定方法    顧燕松

支持向量機(jī)及其應(yīng)用于感應(yīng)加熱裝置優(yōu)化設(shè)計(jì)的研究    富坤

馬鈴薯生料糖化發(fā)酵轉(zhuǎn)化乙醇的研究    蘇小軍

窖池微生態(tài)資源庫(kù)的建立、管理及菌種保藏    張麗鶯

煙草青枯病拮抗菌2-Q-9外泌抑菌物質(zhì)的研究及其編碼基因的克隆    張旭

馬鈴薯生淀粉糖化酶高產(chǎn)菌株的選育及應(yīng)用研究    羅時(shí)

基于失真效應(yīng)的圖像質(zhì)量評(píng)價(jià)與分類    葉小瓊

桉木原料的預(yù)處理及其酶解糖化的研究    尉慰奇

不同預(yù)處理工藝對(duì)竹子制備纖維素乙醇酶解效果的影響    諸力

乳酸抗性酵母的篩選及其生長(zhǎng)特性的研究    王昌祿,杜連祥,顧曉波,路福平,趙學(xué)明,飯村穰,岡崎直人

β-葡萄糖苷酶的研究進(jìn)展(綜述)    李遠(yuǎn)華

綠色木霉纖維素酶AS3.3032固態(tài)發(fā)酵的研究    張德強(qiáng),黃鎮(zhèn)亞,張志毅

纖維素酶高產(chǎn)菌株的選育及產(chǎn)酶條件的研究    孫君社,李雪,董秀芹

黑曲霉變種2281—C纖維素酶的純化和性質(zhì)    洪　,黃秀梨

瘤胃微生物纖維素酶的研究與應(yīng)用前景    藍(lán)賢勇,陳宏,張潤(rùn)鋒,田燚

纖維素酶在速溶茶中的應(yīng)用研究    梁靖,須海榮,蔣文莉,陳利燕

優(yōu)勢(shì)醋酸菌的分離篩選    祖國(guó)仁,劉陽(yáng)

細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展    霍乃蕊,孟利梅

纖維素酶固態(tài)發(fā)酵環(huán)境掃描電鏡觀察    徐福建,陳洪章,邵曼君,李竹川,李佐虎

基質(zhì)利用和酒精發(fā)酵性能改善的重組釀酒酵母    張梁

燃料乙醇發(fā)酵技術(shù)研究進(jìn)展    蘇小軍;熊興耀;譚興和;劉明月;

木質(zhì)纖維生產(chǎn)燃料乙醇工藝的研究進(jìn)展    王璀璨;王義強(qiáng);陳介南;李輝;張振華;

玉米秸稈同步糖化共發(fā)酵工藝條件優(yōu)化    劉慶玉;王曉威;張大雷;

水稻秸稈腐解復(fù)合菌系RSS-4的選育及其腐解特性    劉甲鋒;李力;陳慧君;關(guān)大偉;姜昕;李俊;沈德龍;

中科院研發(fā)甜高粱燃料乙醇獲得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展    柯玨;

云南能源甘蔗開發(fā)燃料乙醇的前景分析    張躍彬;

燃料乙醇發(fā)展問題與對(duì)策研究    齊瑩;

國(guó)際油價(jià)回暖,玉米價(jià)格可能上升    孫彤;

貴州能源甘蔗的發(fā)展前景    羅亞紅;周正邦;周祥;

中國(guó)甘蔗燃料乙醇生產(chǎn)的技術(shù)、經(jīng)濟(jì)和環(huán)境可行性分析    曾麟;王革華;

ADH2等位基因缺失的釀酒酵母雜合子的構(gòu)建    郭曉賢;宋浩雷;江賢章;黃建忠;

我國(guó)生物燃料乙醇可持續(xù)發(fā)展的SWOT分析及戰(zhàn)略選擇    王曉凌;劉靜;

全國(guó)變性燃料乙醇和燃料乙醇標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)簡(jiǎn)介    劉鉞;

速生楊二步超低酸水解液發(fā)酵制取燃料乙醇的研究    袁振宏;莊新姝;王樹榮;駱仲泱;吳創(chuàng)之;岑可法;

巴西發(fā)展燃料乙醇的經(jīng)驗(yàn)以及對(duì)新疆兵團(tuán)生物質(zhì)能建設(shè)的啟示    李冀新;武冬梅;賈雪峰;

釀酒酵母糖基化過程基因工程改造    周峻崗;祁慶生;王鵬;

釀酒酵母ADH3基因的敲除    宋浩雷;郭曉賢;楊月梅;江賢章;黃建忠;

釀酒酵母YS2-△adh2-△ald6突變株的構(gòu)建及hxt1基因的過表達(dá)    王艷尊;高媛媛;施巧琴;吳松剛;黃建忠;

發(fā)展燃料乙醇產(chǎn)業(yè)和推廣車用乙醇汽油若干問題的思考    喬映賓;

應(yīng)當(dāng)十分重視能源甘蔗的育種    翁錦周;洪月云;盧川北;曾日秋;

吉林燃料乙醇生產(chǎn)成本高    杜學(xué)靜

燃料乙醇：中國(guó)新能源戰(zhàn)略的重要角色    本報(bào)記者 于萬夫

發(fā)改委加快編制燃料乙醇產(chǎn)業(yè)政策    宜班

身陷“爭(zhēng)糧”風(fēng)波 燃料乙醇發(fā)展前景迷離    本報(bào)記者 吳凡

多渠道推動(dòng)生物能源開發(fā)    陳頤

秸稈“變油”還有多遠(yuǎn)    本報(bào)記者　 陳建軍

“玉米制乙醇”冒進(jìn),發(fā)改委踩剎車    劉錚

玉米乙醇遇紅燈豐原生化影響甚微    劉行健

燃料乙醇企業(yè)選擇“三突圍”    王鵬

燃料乙醇替代汽油發(fā)展迅速    渙知

水稻秸稈纖維素發(fā)酵轉(zhuǎn)化燃料乙醇的研究    楊濤

釀酒酵母海藻糖代謝工程與抗逆性相關(guān)機(jī)制研究    池小琴

WEB2基因在釀酒酵母S期檢查點(diǎn)調(diào)控機(jī)制中的作用    李新鳴

白念珠菌CaPTC6和CaHXT5基因及釀酒酵母ScATP16基因的功能研究    于立權(quán)

酵母表達(dá)鮭魚降鈣素基因載體的構(gòu)建及相關(guān)研究    孫平楠

呋喃喹啉類生物堿白鮮堿體外抗真菌活性及作用機(jī)制研究    郭娜

鰈形目魚類生長(zhǎng)激素基因的克隆及牙鲆生長(zhǎng)激素在釀酒酵母中的表達(dá)研究    劉濱

白念珠菌和釀酒酵母菌與TOR信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的基因功能鑒定    閆智慧

酵母對(duì)纖維素乙醇生產(chǎn)中的抑制劑響應(yīng)的系統(tǒng)生物學(xué)研究    李炳志

水稻秸稈降解放線菌的分離鑒定及其降解機(jī)理研究    徐杰

纖維素酶系協(xié)同作用實(shí)驗(yàn)及重組酵母的同步糖化發(fā)酵    張艷

康氏木霉與釀酒酵母混菌發(fā)酵玉米秸稈產(chǎn)乙醇的研究    劉梅

發(fā)酵稻草秸稈產(chǎn)燃料乙醇研究    鄭穎潔

兩株重組釀酒酵母的發(fā)酵及一株重組釀酒酵母的初步構(gòu)建    劉繼開

釀酒酵母乙醇脫氫酶Ⅱ基因的敲除    郭曉賢

SPT3定向進(jìn)化提高釀酒酵母乙醇耐性的研究    姜如嬌

玉米秸稈水解液發(fā)酵制取燃料乙醇的研究    曾凡洲

吉林燃料乙醇項(xiàng)目后評(píng)價(jià)研究    劉曉非

電融合法構(gòu)建海藻糖高產(chǎn)菌株的研究    彭帥

酵母基微生物絮凝劑性能及作用機(jī)制研究    劉敏