鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)化煙草的研究及中華補血草LsNHXs基因的功能研究

【摘要】： 第一章鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)化煙草的研究 甲基溴是在全球被廣泛采用的一種熏蒸殺蟲劑,但是,甲基溴對臭氧層和環(huán)境有破壞作用。國際組織呼吁盡快淘汰甲基溴,因此,甲基溴替代技術(shù)的開發(fā)迫在眉睫。 鹵代甲烷的生物合成由以下酶促反應(yīng)完成:SAM(S-腺苷甲硫氨酸)+ X-(Cl-,Br-,I-)→CH3X + S-adenosylhomocysteine(S-腺苷高半胱氨酸),反應(yīng)由一種甲基轉(zhuǎn)移酶(methyl chloride transferase MCT)催化完成。本實驗克隆了來源于甜土植物—擬南芥及來源于鹽生植物—鹽芥和鹽地堿蓬的MCT基因AtMCT(AtHOL)、ThMCT和SsMCT。通過基因工程手段將這三個基因轉(zhuǎn)入煙草,實現(xiàn)基因的過量表達。 土壤甲基溴熏蒸的目標在于殺死具有較高耐藥性的病源物的孢子或其他休眠形式,熏蒸所需濃度高,這也是造成環(huán)境污染的原因。通過轉(zhuǎn)基因手段,賦予轉(zhuǎn)基因煙草微量、持續(xù)產(chǎn)生甲基溴的能力,病源物侵染時可直接對其作用,從而替代甲基溴土壤熏蒸。此技術(shù)在國內(nèi)外尚屬首創(chuàng)。 主要實驗結(jié)果如下: 1)利用RT-PCR和RACE方法克隆獲得ThMCT和SsMCT基因的全長序列。ThMCT基因全長923 bp,開放閱讀框為681 bp,共編碼226個氨基酸,蛋白分子量約為25.1 KD。SsMCT基因全長1094 bp,開放閱讀框為699 bp,共編碼232個氨基酸,蛋白分子量約為25.8 KD。 2)將AtMCT、ThMCT和SsMCT的全長ORF構(gòu)建到植物雙元表達載體pINT4中,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉圓盤法轉(zhuǎn)化煙草,分別獲得了18個AtMCT、20個ThMCT和38個SsMCT基因獨立的轉(zhuǎn)化株系。 3)對轉(zhuǎn)基因植株進行分子鑒定。PCR分析、Southern和Northern雜交結(jié)果表明外源基因已整合進煙草的基因組中并正常轉(zhuǎn)錄。用總蛋白作Western雜交,三種轉(zhuǎn)基因植株均有雜交信號。但是如果主要用可溶性蛋白作Western雜交,則只有AtMCT轉(zhuǎn)基因植株有雜交信號,而ThMCT和SsMCT轉(zhuǎn)基因植株均沒有雜交信號。 4)用不同濃度的處理液處理野生型和轉(zhuǎn)基因煙草,用氣/質(zhì)聯(lián)用儀測定其CH3Cl、CH3Br和CH3I的釋放量。AtMCT轉(zhuǎn)基因植株a12三種氣體的釋放量明顯高于野生型對照,是對照的100倍左右,而ThMCT和SsMCT轉(zhuǎn)基因植株的釋放量和對照差異不明顯。 5)對AtMCT轉(zhuǎn)基因植株a12和野生型植株接種線蟲,在施加Br-,增加底物的情況下,AtMCT轉(zhuǎn)基因植株提高了對線蟲的抗性。 第二章中華補血草LsNHXs基因的功能研究 液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白與植物耐逆密切相關(guān),它利用液泡膜H+-ATPase及H+-PPase泵H+產(chǎn)生的驅(qū)動力把Na+區(qū)隔化入液泡中以消除Na+的毒害,除此之外,液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白還與PH調(diào)節(jié)、囊泡運輸、液泡的發(fā)育以及蛋白質(zhì)分選有關(guān)。液泡不僅是一個物質(zhì)儲存細胞器,在特定的生理條件下,某些植物細胞的液泡可參與礦質(zhì)離子、簡單糖類、有機酸和氨基酸等物質(zhì)的運輸。 早期的電鏡觀察發(fā)現(xiàn),補血草鹽腺分泌細胞內(nèi)有大量的線粒體和豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),缺少清晰的中央大液泡,但細胞內(nèi)有許多液泡樣的小囊泡,小囊泡大部分都靠近細胞質(zhì)膜且經(jīng)常出現(xiàn)與質(zhì)膜的融合,推測囊泡運輸參與了補血草的泌鹽過程。由此推測補血草液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白LsNHXs將對補血草的泌鹽產(chǎn)生一定的影響。因此,本實驗克隆了LsNHXs基因,并利用RNAi技術(shù)對其功能進行了研究。 主要實驗結(jié)果如下: 1)采用RT-PCR和3’-RACE方法從補血草中克隆獲得LsNHXs基因家族三個成員LsNHX1、LsNHX2和LsNHX3的保守區(qū)序列以及LsNHX2和LsNHX3的3’端特異序列。 2)構(gòu)建植物基因RNAi沉默表達載體并轉(zhuǎn)化補血草,獲得三個單基因和一個雙基因的RNAi沉默表達植株,快繁轉(zhuǎn)基因植株供分子鑒定和耐逆分析。 3)LsNHX1轉(zhuǎn)基因植株葉片表面分泌物中的Na+、K+離子含量比野生型對照顯著增加;葉組織內(nèi)Na+離子含量和K+離子含量均略高,但差異不顯著;K+/Na+比沒有顯著差異。 4)LsNHX2轉(zhuǎn)基因植株葉片表面分泌物中的Na+離子含量比野生型對照有所下降,但差異不顯著;K+離子含量比對照顯著降低。LsNHX2轉(zhuǎn)基因植株葉組織內(nèi)Na+離子含量略高,但差異不顯著;K+離子含量和K+/Na+比均降低。 5)LsNHX3轉(zhuǎn)基因植株葉片表面分泌物中的Na+離子含量比對照增加,但差異不顯著,K+離子含量比對照增加,在400 mM NaCl條件下達到顯著差異;葉組織內(nèi)Na+離子含量和K+離子含量均略高;K+/Na+比沒有顯著差異。 6)LsNHX1+LsNHX2雙基因沉默植株葉片表面分泌物中的Na+離子含量比野生型對照增加,K+離子含量與野生型對照相比沒有顯著差異。轉(zhuǎn)基因植株葉中Na+離子含量略高,但差異不顯著;轉(zhuǎn)基因植株葉中K+離子含量及K+/Na+比均降低。 以上結(jié)果表明,LsNHX1、LsNHX2和LsNHX3的作用機制不同。LsNHX2可能定位于小囊泡上,沉默表達后,區(qū)隔化的Na+離子含量降低,導(dǎo)致通過囊泡運輸分泌的Na+離子含量降低。LsNHX1和LsNHX3可能定位于中央大液泡上,主要負責Na+的區(qū)隔化;沉默表達后,液泡中區(qū)隔化的Na+離子含量降低,胞質(zhì)中的Na+離子含量增加,刺激鹽腺泌鹽,導(dǎo)致葉片分泌的Na+離子含量增加。 本研究的主要創(chuàng)新點: 1.首次克隆了鹽生植物—鹽芥、鹽地堿蓬的鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因ThMCT和SsMCT,并對其序列特征進行了詳細的分析。 2.通過過量表達鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因,提高轉(zhuǎn)基因煙草釋放甲基溴的能力,使轉(zhuǎn)基因煙草微量、持續(xù)產(chǎn)生甲基溴,從而替代甲基溴土壤熏蒸。此技術(shù)在國內(nèi)外尚屬首創(chuàng)。 3.首次克隆了補血草的液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白LsNHXs基因家族三個成員LsNHX1、LsNHX2和LsNHX3的部分序列,并將這三個基因分別作了RNAi沉默表達。研究發(fā)現(xiàn)LsNHX1、LsNHX2、LsNHX3的作用機制不同。LsNHX2可能定位于小囊泡上,通過囊泡運輸對補血草的泌鹽起一定的作用,而LsNHX1和LsNHX3可能定位于中央大液泡上,主要負責Na+的區(qū)隔化。 【關(guān)鍵詞】：鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因MCT 甲基溴 根結(jié)線蟲 補血草 囊泡運輸 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白 LsNHXs
【學位授予單位】：山東師范大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• Abstract11-17
• 第一部分 文獻綜述17-46
• 一、鹵代甲烷酶促合成機制17-20
• 1 鹵代甲烷的生物產(chǎn)生機制17-18
• 2 鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆18-19
• 3 鹵代甲烷酶促反應(yīng)機制的生物學意義19-20
• 4 鹵代甲烷的植物發(fā)生論20
• 二、Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白20-38
• 1 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白的分子特性及轉(zhuǎn)運機制21-27
• 1.1 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白的進化分類和亞細胞定位21-23
• 1.2 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白的拓撲結(jié)構(gòu)和功能殘基23-26
• 1.2.1 NHE 的結(jié)構(gòu)與功能調(diào)節(jié)24
• 1.2.2 酵母和真菌質(zhì)膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白C 端的功能24-25
• 1.2.3 植物液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白的結(jié)構(gòu)25-26
• 1.3 大腸桿菌EcNhaA 的Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運機制26-27
• 2 植物液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白27-31
• 2.1 植物液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因家族27-28
• 2.2 植物液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白陽離子選擇性28
• 2.3 植物液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白與植物耐鹽性28-30
• 2.4 植物液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白的其它功能30-31
• 3 NHE/NHX Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白與囊泡運輸31-33
• 4 植物質(zhì)膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白33-38
• 4.1 植物質(zhì)膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白與植物耐逆的關(guān)系33-35
• 4.2 SOS 信號通路35-38
• 4.2.1 SOS 信號通路元件35-36
• 4.2.2 SOS 信號通路36-37
• 4.2.3 SOS 信號通路的保守性37-38
• 4.3 AtNHX838
• 三、囊泡介導(dǎo)的植物細胞可溶性物質(zhì)的轉(zhuǎn)運38-43
• 1 囊泡參與鹽的分泌39-40
• 2 囊泡參與蜜的分泌40-41
• 3 囊泡參與有機酸和蔗糖的分泌41-42
• 4 囊泡參與保衛(wèi)細胞和運動細胞的溶質(zhì)運輸42
• 5 囊泡參與糖和黏附多糖的分泌42-43
• 四、本實驗的意義43-46
• 1 甲基溴替代技術(shù)的開發(fā)43-44
• 2 中華補血草泌鹽機制探討44-46
• 第二部分 實驗論文46-106
• 第一章 鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)化煙草的研究46-73
• 一、實驗材料46-48
• 1 植物材料及線蟲46
• 2 菌種及質(zhì)粒46
• 3 酶及化學試劑46
• 4 主要儀器設(shè)備46-47
• 5 質(zhì)粒提取液47
• 6 培養(yǎng)基47-48
• 7 引物序列48
• 二、實驗方法48-61
• 1 基本分子生物學實驗技術(shù)49-55
• 1.1 大腸桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化49
• 1.2 質(zhì)粒的提取49-50
• 1.3 PCR、酶切以及連接50
• 1.4 Gene Clean 方法從瓊脂糖凝膠上回收外源基因片段50
• 1.5 植物基因組DNA 的提取及Southern 雜交膜的制備50-51
• 1.5.1 植物基因組DNA 的提取—CTAB 法50-51
• 1.5.2 Southern 雜交膜的制備51
• 1.6 Trizol 試劑提取植物總RNA51-52
• 1.7 異硫氰酸胍法提取植物總RNA 及Northern 雜交膜的制備52-53
• 1.7.1 植物組織總RNA 的提取—異硫氰酸胍法52-53
• 1.7.2 Northern 雜交膜的制備53
• 1.7.2.1 RNA 甲醛變性膠電泳53
• 1.7.2.2 RNA 雜交膜的制備53
• 1.8 Southern 雜交和Northern 雜交分析53-54
• 1.8.1 cDNA 探針的制備53-54
• 1.8.2 雜交過程54
• 1.8.3 洗膜及顯影54
• 1.9 Western 雜交54-55
• 1.9.1 植物蛋白的提取方法一54
• 1.9.2 植物蛋白的提取方法二—丙酮沉淀法54-55
• 1.9.3 SDS-PAGE55
• 1.9.4 轉(zhuǎn)膜55
• 1.9.5 Western 檢測55
• 2 ThMCT、SsMCT 基因的克隆55-58
• 2.1 ThMCT、SsMCT 基因保守區(qū)的克隆55-56
• 2.2 ThMCT、SsMCT 基因5’端序列的克隆56-58
• 2.3 ThMCT、SsMCT 基因3’端序列的克隆58
• 3 AtMCT、ThMCT 和SsMCT 基因過量表達載體的構(gòu)建58-59
• 4 植物表達載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化與鑒定59
• 5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草轉(zhuǎn)化59-60
• 6 轉(zhuǎn)基因煙草的PCR 鑒定60
• 7 轉(zhuǎn)基因煙草鹵代甲烷釋放量的測定60-61
• 8 轉(zhuǎn)基因煙草的線蟲抗性實驗61
• 三、實驗結(jié)果61-71
• 1 MCT 基因的克隆及序列分析61-66
• 1.1 ThMCT 基因的克隆61-62
• 1.2 SsMCT 基因的克隆62-63
• 1.3 ThMCT 和SsMCT 的氨基酸序列分析63-64
• 1.4 ThMCT 和SsMCT 的系統(tǒng)譜系分析64-65
• 1.5 AtMCT、ThMCT 和SsMCT 的拓撲結(jié)構(gòu)分析65-66
• 2 AtMCT、ThMCT 和SsMCT 基因過量表達載體的構(gòu)建66
• 3 植物表達載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化與鑒定66
• 4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草轉(zhuǎn)化66
• 5 轉(zhuǎn)基因煙草的分子鑒定66-69
• 5.1 轉(zhuǎn)基因煙草的PCR 分析66
• 5.2 轉(zhuǎn)基因煙草的Southern 雜交分析66-67
• 5.3 轉(zhuǎn)基因煙草的Northern 雜交分析67-68
• 5.4 轉(zhuǎn)基因煙草的Western 雜交分析68-69
• 6 轉(zhuǎn)基因煙草鹵代甲烷釋放量的測定69-70
• 7 轉(zhuǎn)基因煙草的線蟲抗性實驗70-71
• 四、討論71-73
• 1 ThMCT 和SsMCT 的序列特征71
• 2 過量表達AtMCT 提高了轉(zhuǎn)基因煙草對線蟲的抗性71-73
• 第二章 中華補血草LsNHXs 基因的功能研究73-106
• 一、實驗材料73-75
• 1 植物材料73
• 2 菌種及質(zhì)粒73
• 3 酶及化學試劑73
• 4 主要儀器設(shè)備73
• 5 質(zhì)粒提取液73
• 6 培養(yǎng)基73-74
• 7 引物序列74-75
• 二、實驗方法75-84
• 1 基本分子生物學實驗技術(shù)75-77
• 1.1 大腸桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化75
• 1.2 質(zhì)粒的提取75
• 1.3 PCR、酶切以及連接75
• 1.4 Gene Clean 方法從瓊脂糖凝膠上回收外源基因片段75
• 1.5 植物基因組DNA 的提取及Southern 雜交分析75
• 1.6 Trizol 法和異硫氰酸胍法提取植物總RNA75
• 1.7 CTAB 改良法提取中華補血草總RNA75-76
• 1.8 DNaseI (RNase Free) 去除補血草RNA 中的基因組DNA76-77
• 2 中華補血草LsNHXs 基因的克隆77-78
• 2.1 中華補血草LsNHXs 基因保守區(qū)的克隆77
• 2.2 LsNHX2 和LsNHX3 基因3’端序列的克隆77-78
• 3 LsNHXs 基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建78-79
• 3.1 LsNHX1、LsNHX2、LsNHX3 單基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建78-79
• 3.2 LsNHX1+LsNHX2 雙基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建79
• 4 植物表達載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化與鑒定79-80
• 5 中華補血草的遺傳轉(zhuǎn)化80
• 5.1 農(nóng)桿菌菌液的制備80
• 5.2 補血草葉片的轉(zhuǎn)化80
• 5.3 抗性芽的生根80
• 5.4 抗性苗的快速繁殖及移栽80
• 6 轉(zhuǎn)基因補血草的分子鑒定80-82
• 6.1 轉(zhuǎn)基因補血草的PCR 鑒定80-81
• 6.2 轉(zhuǎn)基因補血草LsNHXs 基因表達的Real-time PCR 分析81-82
• 6.2.1 補血草RNA 的提取及定量81
• 6.2.2 RNA 的反轉(zhuǎn)錄及cDNA 模板的稀釋81
• 6.2.3 實時定量PCR 引物的設(shè)計81-82
• 6.2.4 實時定量PCR（Real-time PCR）82
• 6.2.5 Real Time PCR 數(shù)據(jù)分析的方法82
• 7 轉(zhuǎn)基因補血草的耐逆性分析82-84
• 7.1 野生型與轉(zhuǎn)基因補血草的快速繁殖82-83
• 7.2 野生型與轉(zhuǎn)基因補血草的鹽脅迫處理83
• 7.3 葉片表面分泌物中Na~+、K~+離子含量的測定83
• 7.4 葉面積的測定83
• 7.5 葉片組織內(nèi)Na~+、K~+離子含量的測定83
• 7.6 植物材料含水量的測定83-84
• 三、實驗結(jié)果84-103
• 1 中華補血草LsNHXs 基因的克隆84-89
• 1.1 中華補血草RNA 的提取84
• 1.2 中華補血草LsNHXs 基因保守區(qū)的克隆84-86
• 1.3 LsNHX2 和LsNHX3 基因3’端序列的克隆86-89
• 2 LsNHXs 基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建89-92
• 2.1 LsNHXs 單基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建及酶切驗證89-90
• 2.1.1 LsNHXs 單基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建89-90
• 2.1.2 LsNHXs 單基因RNAi 沉默表達載體的酶切驗證90
• 2.2 LsNHX1+LsNHX2 雙基因RNAi 沉默表達載體的構(gòu)建及酶切驗證90-92
• 3 植物基因RNAi 沉默表達載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及PCR 驗證92
• 4 中華補血草的遺傳轉(zhuǎn)化92
• 5 轉(zhuǎn)基因補血草的分子鑒定92-96
• 5.1 轉(zhuǎn)基因補血草的PCR 鑒定92-93
• 5.2 轉(zhuǎn)基因補血草的Southern 雜交分析93-94
• 5.3 轉(zhuǎn)基因補血草LsNHXs 基因表達的Real-time PCR 分析94-96
• 6 轉(zhuǎn)基因補血草的耐逆性分析96-103
• 6.1 LsNHX2 轉(zhuǎn)基因補血草的耐逆性分析96-98
• 6.1.1 LsNHX2 轉(zhuǎn)基因補血草在不同鹽脅迫條件下的生長情況96
• 6.1.2 鹽處理對LsNHX2 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株含水量的影響96
• 6.1.3 鹽處理對LsNHX2 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片表面分泌物中Na~+、K~+離子含量的影響96-97
• 6.1.4 鹽處理對LsNHX2 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片組織內(nèi)Na~+、K~+離子含量的影響97-98
• 6.2 LsNHX1、LsNHX3 和LsNHX1~+LsNHX2 轉(zhuǎn)基因補血草的耐逆性分析98-103
• 6.2.1 LsNHX1、LsNHX3 和LsNHX1+LsNHX2 轉(zhuǎn)基因補血草在不同鹽脅迫條件下的生長情況98
• 6.2.2 鹽處理對LsNHX1、LsNHX3 和LsNHX1+LsNHX2 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株含水量的影響98-99
• 6.2.3 鹽處理對LsNHX1 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片表面分泌物中Na~+、K~+離子含量的影響99-100
• 6.2.4 鹽處理對LsNHX1 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片組織內(nèi)Na~+、K~+離子含量的影響100
• 6.2.5 鹽處理對LsNHX3 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片表面分泌物中Na~+、K~+離子含量的影響100-101
• 6.2.6 鹽處理對LsNHX3 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片組織內(nèi)Na~+、K~+離子含量的影響101
• 6.2.7 鹽處理對LsNHX1+LsNHX2 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片表面分泌物中Na~+、K~+離子含量的影響101-102
• 6.2.8 鹽處理對LsNHX1+LsNHX2 轉(zhuǎn)基因植株與野生型植株葉片組織內(nèi)Na~+、K~+離子含量的影響..102-103
• 四、討論103-106
• 1 中華補血草RNA 的提取103-104
• 2 RNAi 技術(shù)在植物功能基因組學研究中的應(yīng)用104
• 3 中華補血草液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白LsNHXs 對其耐鹽性的影響104-106
• 圖版106-110
• 參考文獻110-121
• 攻讀博士學位期間發(fā)表的論文121-122
• 致謝122

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西瓜花蕾總RNA提取與mRNA差異顯示技術(shù)    于遠;張顯;于蓉;楊玉梅;

山梨醇對李果肉組織總RNA提取的影響    徐秋紅;高志紅;渠慎春;喬玉山;

生物農(nóng)藥評述    張興;馬志卿;李廣澤;江志利;何軍;馮俊濤;

多漿旱生植物霸王液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因ZxNHX在響應(yīng)鹽和干旱中的作用(英文)    伍國強;席杰軍;包愛科;王茜;王鎖民;

油茶種子胚乳總RNA提取方法研究及改良    胡姣;譚曉風;張琳;龍洪旭;田曉明;

馬鈴薯病毒一步法RT-PCR診斷研究    關(guān)翠萍;張鶴齡;門福義;宋艷茹;蒙美蓮;陳正華;

石斛屬植物成熟葉片總RNA提取方法比較    仇碩;熊磊;屈媛;吳佳;劉張棟;王彩云;

農(nóng)桿菌介導(dǎo)的獼猴桃遺傳轉(zhuǎn)化及AtNHX1轉(zhuǎn)化植株抗鹽性分析；擬南芥At4G12490基因?qū)δ婢车目剐怨δ苎芯?nbsp;   田娜

柚（citrus grandis Osbeck）單染色體AFLP分子標記體系及文庫的建立    王發(fā)明

何首烏芪合酶基因（FmSTS）的克隆、鑒定及轉(zhuǎn)化擬南芥研究    生書晶

SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表達及其耐鹽性研究    李望豐

突變分析NHA2在酵母中的功能及其在哺乳動物細胞和小鼠中的表達作用研究    黃曉斌

大黃酚對黃瓜白粉病菌的抑制作用機制研究    任紅敏

歐李抗逆性研究和不同資源農(nóng)藝性狀與分子標記遺傳變異    姜英淑

細胞酸堿內(nèi)環(huán)境對白血病細胞分化及耐藥的影響及相關(guān)機制研究    金薇娜

NHE1通過調(diào)節(jié)MT1-MMP介導(dǎo)MDA-MB-231細胞的體外轉(zhuǎn)移    藺亞妮

外來入侵植物—少花蒺藜草的分布與生物學特性研究    徐軍

基于數(shù)字圖像的冬小麥、夏玉米長勢遠程動態(tài)監(jiān)測技術(shù)研究    馬彥平

棉花纖維發(fā)育伸長期和次生壁加厚期數(shù)字表達譜分析    閆恒超

分析耐鹽基因與啟動子功能的CRE/loxP重組激活系統(tǒng)的構(gòu)建與檢驗    朱瑩

黃瓜液泡膜H~+-PPase基因的cDNA克隆與表達分析    洪艷艷

花生耐鹽基因的克隆與表達譜分析    王寶枝

苜?？鼓婊虻腸DNA克隆和轉(zhuǎn)基因煙草功能的初步驗證    曾光

毛竹Na~+轉(zhuǎn)運功能相關(guān)基因克隆與表達分析及BIBAC基因組文庫的構(gòu)建    楊洋

綠豆環(huán)氧水解酶基因克隆、表達及酶學性質(zhì)表征    賀婉紅

小麥耐鹽生理及耐鹽相關(guān)基因TaNHX3功能的初步研究    孫永媛

擬南芥耐鹽基因AtNHX5的大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究    鄭文永

中華補血草的組織培養(yǎng)和快速繁殖體系的優(yōu)化    陳世華;張霞;趙彥修;張慧;

二色補血草的組織培養(yǎng)和離體快繁研究    陳海偉;劉冰;李丹;王大海;

二色補血草的組織培養(yǎng)與快速繁殖    那淑芝,李云祥,甄占萱,戴繼先

水中微量氯離子的微型測定    申海燕

檉柳泌鹽腺結(jié)構(gòu)、功能及分泌機制研究進展    張道遠,尹林克,潘伯榮

植物耐鹽性分子生物學研究進展    羅秋香;管清杰;金淑梅;柳參奎;

二色補血草(Limonium bicolor)高頻再生體系的建立    陳菲;李黎;宮偉;

雜種補血草組織培養(yǎng)與栽培技術(shù)    杜興臣;周淑香;閆曉煜;

黃花補血草的組織培養(yǎng)及快速繁殖    郝玉蘭;徐杰;閆瑞霞;

植物寄生線蟲生防因子研究進展    張猛,張?zhí)煊?張玉娜

水稻KCC基因的功能研究及鹽芥小RNA的功能研究    孔祥強

二色補血草葉片鹽腺的功能及其泌鹽機理的探討    韓軍麗

鹽生植物獐毛耐鹽基礎(chǔ)生理的研究    劉志華

鹽脅迫對中亞濱藜營養(yǎng)器官內(nèi)部結(jié)構(gòu)的影響及其鹽囊泡發(fā)育過程研究    楊美娟

中華補血草遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及補血草NKCC基因沉默的功能研究    張霞

煙臺補血草鹽腺結(jié)構(gòu)及發(fā)育過程觀察    辛莎莎;譚玲玲;初慶剛;

二色補血草的組織培養(yǎng)與快速繁殖    那淑芝,李云祥,甄占萱,戴繼先

黃河三角洲農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)潛力    許學工

檉柳泌鹽腺結(jié)構(gòu)、功能及分泌機制研究進展    張道遠,尹林克,潘伯榮

應(yīng)用細菌防治植物寄生線蟲    黃必旺,喻子牛,黃志鵬

噬線蟲真菌研究進展    王泊理,高學彪

一種測定植物葉面積方法的研究    胡顯華,石文茂

應(yīng)用數(shù)字圖像處理測定作物葉面積的簡便方法    張恒敢,楊四軍,顧克軍,李德民

中國野生大豆鹽腺的發(fā)現(xiàn)    陸靜梅,劉友良,胡波,莊炳昌

植物葉片面積測量系統(tǒng)的設(shè)計及應(yīng)用    張全法,馮絢,何金田,陳渝仁

Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白和植物耐鹽性    任仲海,馬秀靈,趙彥修,張慧

二色補血草葉片鹽腺的功能及其泌鹽機理的探討    韓軍麗

鹽生植物獐毛耐鹽基礎(chǔ)生理的研究    劉志華

我國根結(jié)線蟲的種類、分布及其寄主植物名錄    張云美;

替代甲基溴的土壤消毒技術(shù)    張成省,孔凡玉,王鳳龍,李聯(lián)玉

殺滅棉花紅鈴蟲的良藥甲基溴自制成功    

福建省經(jīng)濟作物寄生線蟲的研究——Ⅳ.福建根結(jié)線蟲的掃描電鏡觀察    潘滄桑,林競,王生元

海洋降解縮短了甲基溴在大氣中的壽命    英

不可忽視的作物根結(jié)線蟲病    石鴻文,潘晟

海南島林木根結(jié)線蟲    何宏珍,段定仁

根結(jié)線蟲的種類及其寄主植物續(xù)述    潘滄桑,林競,王生元,吳順章

根結(jié)線蟲生防菌劑介紹    方新,王志學,周建樹

大花補血草優(yōu)株無性系的建立    倪躍元,朱錦文,趙曉藝

甲基溴替代技術(shù)對番茄根結(jié)線蟲和土壤自由生活線蟲種群動態(tài)的影響    陳云峰;曹志平;

26%磷化鈣塊劑作為溴甲烷替代劑對土壤根結(jié)線蟲的影響    仉歡;王開運;

遼寧省蔬菜根結(jié)線蟲病的發(fā)生與危害    陳立杰;段玉璽;朱曉峰;白春明;魏峰;劉維志;

甲基溴土壤消毒替代技術(shù)的綜合評價    曹志平;鄭長英;陳國康;陳云峰;楊杭;

蔬菜根結(jié)線蟲防治方法研究進展    閔紅;楚桂芬;周新強;周亞東;

19個煙草品種對三種常見根結(jié)線蟲抗性測定的研究    白萬明;俞盛甫;胡先奇;吳正舉;

4種根結(jié)線蟲的rDNA-ITS研究    彭德良;S.A.Subbotin;Maurice Moens;

根結(jié)線蟲生物防治研究進展    祝明亮;

山東石榴根結(jié)線蟲的發(fā)生與防治    孫瑞紅;于欣;苑兆和;尹燕雷;侯樂峰;郝兆祥;楊福;

蔬菜根結(jié)線蟲病的生物防治初報    楊雪梅;陳愛英;畢章寶;王馬的;戴慧萍;師素英;閆新新;

采納政協(xié)建議 安丘農(nóng)產(chǎn)品病害有了環(huán)保“藥方”    殷永 陳鑫

甲基溴淘汰勢不可擋    李紅兵

國家環(huán)保部甲基溴淘汰現(xiàn)場驗收組到德昌檢查工作    羅睿 周國璐

不用甲基溴 蟲害可解決    方芳

我國就淘汰甲基溴行動方案進行研討    記者 宗建樹

山東安丘：農(nóng)民種上環(huán)保田    記者 單保江　通訊員 田杰

蔬菜關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)問答    王芳德　劉文寶

省農(nóng)科院選出5種高效低毒殺蟲劑    記者 范南虹　通訊員 謝瓊

補血草栽培法    雨帆　編譯

我國甲基溴替代品暢銷海外    記者 張興剛 張建民

鹵代甲烷甲基轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)化煙草的研究及中華補血草LsNHXs基因的功能研究    李維煥

Bacillus cereus X5的殺線活性及其生物有機肥對南方根結(jié)線蟲的防治作用研究    肖同建

根結(jié)線蟲拮抗放線菌的篩選及菌株HA10002和DA09202活性物質(zhì)的研究    曾慶飛

水稻根部線蟲鑒定及潛根線蟲根結(jié)線蟲對水稻的致病性    謝志成

二硫氰基甲烷防治番茄根結(jié)線蟲病（Meloidogyne spp.）的研究及其對土壤生態(tài)的影響    祁之秋

抗性砧木嫁接番茄控制土傳病害的研究    鄭長英

辣椒與根結(jié)線蟲不親和互作相關(guān)基因的分離及功能分析    茆振川

釀酒酵母中TRAPP復(fù)合體的三個亞基在囊泡運輸和細胞自噬中的功能研究    劉玉濤

釀酒酵母中TRAPP復(fù)合體專一性亞基在囊泡運輸和細胞自噬中的功能研究    鄒珅珅

甲基溴替代技術(shù)條件下溫室土壤生物群落特征及地下食物網(wǎng)研究    陳國康

甲基溴替代技術(shù)對番茄根結(jié)線蟲和土壤自由生活線蟲種群動態(tài)的影響    陳云峰

根結(jié)線蟲種群密度對我國北方蔬菜生長的影響    耿亞玲

防治根結(jié)線蟲的溴甲烷替代技術(shù)篩選    李為

根結(jié)線蟲生防菌的篩選及其生物有機肥研制    陳芳

利用DDRT-PCR技術(shù)鑒定和克隆鹽生植物補血草（Limonium sinense O）耐鹽相關(guān)基因    戰(zhàn)祥強

敏感型葡萄品種對根結(jié)線蟲侵染的生理生化響應(yīng)    王鳳攀

抗根結(jié)線蟲紅樹林放線菌的分離、篩選及三株活性菌株的鑒定    魏華

辣椒抗根結(jié)線蟲基因Me3的精細定位研究    許小艷

甲基溴土壤消毒替代技術(shù)對溫室土壤原生動物群落的影響    楊杭

黃瓜抗根結(jié)線蟲基因工程的初步研究    孟莎莎