瘤胃甲烷生成菌PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化

【摘要】：[目的]優(yōu)化適合于瘤胃甲烷生成菌的PCR反應(yīng)體系。[方法]以1.5周歲健康的藏系綿羯羊瘤胃內(nèi)容物總DNA為模板,用特異性引物對甲烷生成菌16SrDNA保守序列進行PCR擴增,并通過改變PCR反應(yīng)體系中的各參數(shù),優(yōu)化其PCR反應(yīng)體系中的相關(guān)參數(shù)。[結(jié)果]PCR最優(yōu)程序為:94℃預(yù)變性3 min;94℃變性45 s,51℃退火45 s,72℃延伸90 s,35個循環(huán);72℃后延伸7 min。優(yōu)化后的PCR反應(yīng)體系為:5.00μl緩沖液,4.00μl d-NTP,2.00μl引物(前引物和后引物各1.00μl),4.00μl MgCl2,0.25μlTaqDNA聚合酶和1.00μl 1∶100倍稀釋的DNA模板,然后加水補足25.00μl。[結(jié)論]該研究為瘤胃甲烷生成菌功能的研究奠定了基礎(chǔ)。 【作者單位】： 江蘇畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學院;甘肅農(nóng)業(yè)大學生物技術(shù)工程學院;蘭州大學草地農(nóng)業(yè)科技學院甘肅草原生態(tài)研究所;蘭州大學青藏高原生態(tài)系統(tǒng)管理國際中心;
【關(guān)鍵詞】： 甲烷生成菌 SrDNA PCR反應(yīng)條件 優(yōu)化
【基金】：國家自然科學基金重點項目(30730069)
【分類號】：S852.6
【正文快照】： 產(chǎn)甲烷菌是一類能將無機或有機化合物進行厭氧發(fā)酵轉(zhuǎn)化成甲烷和二氧化碳的古細菌,生活在各種自然環(huán)境及一些極端的環(huán)境中,如有機廢棄物處理、沼氣發(fā)酵、反芻動物的瘤胃中。研究表明,甲烷是與全球氣候變化密切相關(guān)的溫室氣體,而反芻家畜是農(nóng)業(yè)溫室氣體釋放的一個主要來源。為

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