瘤胃總甲烷菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的構(gòu)建

【摘要】：試驗(yàn)構(gòu)建了瘤胃總甲烷菌實(shí)時(shí)熒光絕對(duì)定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)曲線用于總甲烷菌的定量測(cè)定,并提取瘤胃微生物總DNA,以甲烷菌特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,回收純化PCR產(chǎn)物,與pBS-T載體連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌,再用氨芐西林培養(yǎng)基篩選陽(yáng)性重組質(zhì)粒,提取含目的片段質(zhì)粒DNA,通過PCR及測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒。根據(jù)OD值確定濃度,將梯度稀釋的質(zhì)粒作為模板,進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明:所構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有很高的相關(guān)性(R2=0.992),并獲得了高擴(kuò)增效率產(chǎn)物。 【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院生物中心;日本國(guó)家農(nóng)業(yè)生物資源研究所動(dòng)物科學(xué)研究組;
【關(guān)鍵詞】： 瘤胃甲烷菌 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒 標(biāo)準(zhǔn)曲線
【基金】：中日合作項(xiàng)目“關(guān)于中國(guó).亞洲東部區(qū)域反芻家畜生產(chǎn)狀況利用及甲烷排放量的研究”
【分類號(hào)】：S852.6
【正文快照】： 甲烷菌是廣泛存在于反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)的一類嚴(yán)格厭氧古細(xì)菌,它的生成損耗2%~12%的飼料能量,也是被公認(rèn)的與全球氣候變化密切相關(guān)的溫室氣體,因此減少家畜體內(nèi)甲烷的生成不僅可以提高飼料能量利用率,增加動(dòng)物的生產(chǎn)性能,而且對(duì)控制溫室效應(yīng)、改善環(huán)境有重要意義。MCR(methyl coen

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